Orchidouxdingues

Merci,

De toute façon avant de me lancer je ferait des plan et je vous montrerais différente solution.

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Salut Paul,
L'essentiel est que en faisant comme tu fais tu n'aies pas de conta. C'est juste que la plupart voire toutes les hottes pro ont un cache ou alors tournent en permanence.
l'idée c'est que si un champignon se fixe sur ton filtre, celui-ci se transformera en pulvérisateur à spores et il est dur de s'en débarrasser quand ca arrive.

@Moogly: tu veux faire une hotte à flux laminaire. Les hottes pro n'ont pas du tout de panneau en plexi qui perturbe le flux d'air en sortie. cela créerait des turbulences qui ne sont pas bonnes pour la stérilité. Je te conseille vraiment d'avoir un cache que tu enlèves complètement lorsque tu travailles. Tu seras plus à l'aise et le flux sera laminaire ce qui te garantira la stérilité.

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Poliben utilise une lampe à UV et pourrait sans doute nous renseigner sur la dangerosité. Malheureusement, il doit être bien occupé à cultiver "ses" tomates.

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Jean-Bruno

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J'ai trouvé un filtre hepa de bonne dimension mais il ne donne pas la pression statique du filtre, j'ai donc appelé le fabricant pour il posé la question mais le commercial m'a répondu qu'il ne pense pas que le fabricant divulguera cette information car la fabrication du filtre est breveté. Penser vous, si je contact la boite mère, qu'ils me donneront la réponse? Car je me pense pas que ca rentre dans les secrets de fabrication de donner une pression statique. Pour info c'est un filre pour purificateur blueair 303. Ils donne en caractéristique 220 m3/h max pour le débit du ventilateur.
Sans la pression je suis embêter pour choisir mon souffleur.

Sinon j'ai fait des plans en fonction du filtre est peut être des souffleur d'air.

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salut Moogly,

pas mal le plan de la hotte. j'y ferais 2 modifications:

d'abord le neon UV serait sur l'avant de la hotte de manière à illuminer le filtre HEPA
ensuite, il faudrait que le cadre autour du filtre HEPA soit le plus fin possible (idéalement, il n'en faudrait pas)

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Merci étienne,
je vais réduire le cadre autour du filtre, sinon le néon ce n'est pas un UV mais un néon normal pour éclairer ma zone de travail.

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Dsl pour le double post

Voici un résumer de tout ce qui à était dit dans ce post.
Voila ce que j'ai retenus pour la construction de ma hotte. Bon je l'impression que ca n'intéresse par grand monde
mais je vous le post quand même, ca vous donneras peut être des idées.

Pour commencer, je vous mets la liste du matériels principal que j'ai ou que je vais acheter :

- Pré-filtre (2.75€) : Filtre en polyester (mousse blanche pour hotte de cuisine).

- Filtre HEPA (50€ + 7€ de FDP) : Je voulais un filtre qui ne soit pas trop cher avec de bonne performance et j'ai trouvé un filtre
pour purificateur d'air Blueair 200 ou 303, il est de dimension suivante : 460x360x42 avec une pression statique
de 20 Pa. Je sais que cela parait très faible, mais la société Blueair à déposé un brevet sur la fabrication de
leurs filtre (HEPASilents), ils ont les même caractéristique filtrante que les filtres de classes H14.

- Extracteur (72€) : J'ai d'abord calculer le debit d'air que j'avais besoin par rapport à la surface du filtre HEPA, afin qu'en
sortie de filtre j'ai une vitesse de 0.5m/s. Voici le calcul :
Calcul du debit :
Surface du filtre = 0.46x0.36,
S = 0.1656 m².
Débit théorique du souffleur = 0.1656x30,
D = 4.968 m3/min soit 298.08 m3/h. Débit minimum 300m3/h.
Une fois que j'ai eu le débit théorique ainsi que la pression statique du filtre, j'ai pu choisir mon extracteur,
j'ai donc pris un extracteur Winflex VK 125 365m3/h chez culture indoor (ils ont une boutique à reims donc pas de FDP).
D'après les courbes, il me restitue un débit de 312m3/h à une pression statique de 50 Pa.
Vaut mieux prendre plus puissant que les calculs théorique.

Une fois tout le matériel choisit, j'ai fait les plans que voici :



Qu'en pensez vous ? Faut il que je modifie quelque chose ?
J'ai déjà acheté l'extracteur et le Pré-filtre, il faut que je commande le Filtre HEPA et que je regarde la quantité
de bois qu'il me faut. Pour l'intérieur de la zone stérile (afin de nettoyer la zone) je pensé mettre du plastique autocollant
sur les parois de la zone stérile. Je vais aussi faire un cache en plexiglas pour protéger la zone stérile de toute intrusion
lorsque je ne l'utiliserais pas.

Voila je posterais des photos de la construction des que je l'aurais commencer.

Merci de m'avoir lu.

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Salut,

Le sujet est intéressant et mérite d'être évoqué !

Une question :

- à quoi correspond la pente que tu matérialises entre l'extracteur et le filtre ? Cet espace est une chambre de pression appelée plenum et sert à casser le flux de l'intracteur de façon à ce qu'il revienne à angle droit (à l'horizontal donc) sur le filre, pour assurer une diffusion idéale du flux sur l'ensemble de la surface du filtre.
La pente que tu matérialises empêche le plenum de remplir sa fonction et va créer des zones ou le souffle sera plus faible, ce qui entraînera des turbulences dans la zone de travail (le but de la hotte étant d'avoir un flux "laminaire" justement" et non pas "turbulent") et donc une source de contamination potentielle

Deux remarques :
- je te refais la même qu'Etienne concernant le néon : UV ou pas UV, il est quand même mal placé. Dans l'idéal, ton haut de hotte est transparent et le néon ou l'éclairage est placé sur le dessus
- n'espère pas de bons résultats des filtres destinés aux purificateurs d'air, il ne s'agit pas d'être pro ou pas. Spores et bactéries se fichent de ce genre de détails. Mais j'ai peur que tu fasses une erreur stratégique : tu penses que la hotte est plus efficace que le bec bunsen.

La réalité materielle de la zone de stérilité du bec bunsen ne peut pas être remise en question. Elle est bien là.
En revanche, chaque geste que l'on fait à l'intérieur de cette zone perturbe celle-ci et ce sont ces perturbations, ces turbulences si tu préfères, qui mènent à la contamination de ton milieu de culture. Si tu ne maîtrises pas les gestes nécessaires aux manipulations dans une zone stérile, j'ai peur que la hotte ne t'apporte pas de satisfaction particulière.

D'autre part, ces gens dont tu parles ont-il fait l'analyse des contaminations qu'ils ont eue afin de comprendre à quel stade elles sont intervenues ? Ont-ils modifié leur méthode de travail afin de supprimer l'origine de la contamination ? Si ce travail n'a pas été fait, les contaminations perdureront, hotte ou pas hotte...

Le petit exercice que je me suis imposé à titre d'illustration de ces propos :

Etape 1. Je prépare et coule les milieux de culture trois semaines avant le semis
Ainsi si une contamination apparaît durant ce laps de temps, je sais qu'elle peut être liée :
- à ma méthode de stérilisation
- à l'étancheité du contenant (joint entre le bouchon et le flacon par exemple)
- à la qualité du "filtre" (mèche de coton cardé par exemple) qui permet les échanges gazeux entre l'intéreiur du flacon et l'extérieur
Cela me fait trois pistes d'amélioration possible et je devrai persévérer dans la poursuite de chacune de ces pistes jusqu'à ce que je n'ai plus de contamination avant d'envisager l'étape suivante.

Etape 2. Je sème
Si une contamination apparaît, je sais qu'elle ne peut provenir que des sources suivantes puisque j'ai éliminé les sources de contamination de l'étape 1 :
- mauvaise stérilisation des graines ou des explants (le départ se fait alors en général sur les graines elles-mêmes, c'est un bon indice)
- mauvais protocole de desinfection des outils utilisés (ais-je bien flambé mes outils à l'alcool, avant de les utiliser ?)
- mauvais desinfection de la surface de travail
- à de mauvais gestes : j'ai croisé mes mains, j'ai fait des gestes brusques ou trop larges, j'ai oublié de mettre un masque, j'ai oublié de me laver les mains, j'ai oublié de les frotter régulièrement à l'alcool, j'ai posé le bouchon/couvercle/capsule l'intérieur vers le haut, je n'ai pas flambé le goulot ni le bouchon/capsule/couvercle avant de refermer la flasque
- environement non sécurisé : fenêtre ouverte, passages intempestifs d'animaux plus ou moins domestiques, de conjoints ou de progeniture provoquant des perturbations de la zone de convection du bec bunsen

Cela fait au moins cinq pistes d'amélioration possibles (je suis à peu près certaine d'en avoir oublié une quinzaine d'autres) et je devrai persévérer dans la poursuite de chacune de ces pistes jusqu'à ce que je n'ai plus de contamination avant d'envisager sereinement l'étape suivante.

Etape 3. Celle de l'émerveillement : ça pousse, cool. Je n'ai pas de contamination, parce que je me suis assurée :
- à l'étape 1. que le contenant, ce qui le bouche et ce qui permet son aération sont parfaitement fiables et ne peuvent en aucun cas être une source de contamination
- et à l'étape 2. que les graines/explants étaient bien stériles, avant de stérilement les introduire dans un contenant stérile.

4. Oh, oh, ça pousse tellement bien qu'il faut que je repique tout ça. Ca signifie à peu de chose prêt de repasser par l'étape 2...
La seule bonne nouvelle de l'étape 4. : on peut se passer de la phase de la stérilisation puisque les protocormes/plantules/explants sont par définition déjà stériles.

Et tout sera à refaire deux à trois fois avant d'ésperer pouvoir exploiter à l'air libre le fruit de ce dur labeur.

Bref, l'in-vitro c'est avant tout un cheminement intérieur, une philosophie oserais-je. En tout cas un art de vivre forcément, tellement que c'est contraignant...

Après quand on maîtrise tout ça, avoir une hotte c'est surtout le confort de pouvoir travailler à une plus grande échelle, et plus rapidement. En revanche, elle ne peut malheureusement pas se substituer à la rigueur d'une bonne méthode de travail.

Voilà, ce que j'en pense moi de la question. C'est un peu comme si on m'expliquait sans avoir appris à le conduire, qu'un avion c'est super pratique pour voler. Le problème c'est que quand on sait pas conduire un avion, au mieux on reste cloué au sol, au pire on s'écrase. C'est un peu fort comme image, mais tu vois l'idée.

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Merci pour ces remarques Damas. Très intéressant, comme souvent dans tes posts.

Une hotte doit quand même apporter un peu plus de confort pour faire les gestes non ? D'autant plus que ça supprime la zone de chaleur et qu'on risque moins de se brûler (ce qui provoque à coup sûr un geste brusque).

J'ai une question sur le filtre qui permet les échanges gazeux entre l'intérieur et l'extérieur du flacon : est-il ndispensable ? Je pense avoir un début de germination dans un de mes flacons semés dernièrement. Mais je n'ai pas de filtre sur le bouchon du flacon. Que va-t-il se passer ?

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Jean-Bruno

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Bonjour,Moogly je ne changerais pas une virgule au post de Damas, elle a tout dit avec une grande pertinence et , bien sûr je partage son opinion
@Jbd:pour le filtre dans bouchon il est indispensable, pour équilibrer la pression athmospherique à l'intérieur d'icelui,
et pour l'étape de la stérilisation , ça peut contribuer fortement au non éclatement des flacons soumis à de fortes pressions .

Merci damas,

Je vais donc enlever cette plaque. Moi je dirais comme jbd, cela apporte un peu plus de confort pour faire les gestes et pour moi même beaucoup plus.

Damas : ce que tu dit ici :
c'est justement le gros problème chez moi, je ne suis jamais tranquille. J'ai réussi a faire ma 1er CIV de st paulia autour d'une flamme, sans contamination au bout de presque 3 semaine, et je ne trouve pas ca vraiment pratique et la zone est vraiment limité.
Avec la hotte j'aurais une plus grande zone. Pour le filtre du purificateur, justement je pense que c'est vous qui dénigrez un peu l'efficacité du filtre, j'ai vu des test de pro sur ce filtre, il en résulte qu'il est extrêmement efficace (fait par des organisme independant). Sinon je n'ai jamais dit que la hotte est plus efficace que la flamme mais que cela peu eviter les contamination du à l'environement, Pasteur a bien fait ces decouverte autour d'une flamme. Une hotte en plus de donner un air sterile donne une pression positive dans la zone, et cette pression empeche les contaminants de rentrer, afin c'est ce que j'ai cru comprendre. Pour le neon ce n'est pas un UV mais un neon qui va servir a l'eclairage. Et encore merci damas pour ton intervention. Je n'abandonne pas, mais je n'est les moyens d'acheter un filtre pro (194€ ht), donc je cherche dans des solutions moins cher.

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Moogly je comprends, j'aimerai simplement que tu ne sois pas déçu. La hotte est un excellent outil qui apporte beaucoup de confort, mais je parle d'un hotte construite dans les règles de l'art, et surtout utilisée avec toute la discipline qu'impliquent les manipulations stériles.

Le risque, en partant un peu sur du bricolage (et ce n'est pas péjoratif, ici tout le monde te dira que j'adore le bricolage), et sans la maîtrise des bases, c'est qu'au final tu dépenses une somme importante pour un résultat de faible efficacité.
Il faut parfois mieux attendre, bien réfléchir et investir un peu plus pour un résultat de meilleur qualité, même en fabricant tout soi-même.

Pour ton néon j'ai (très) bien compris que ce n'était pas des UV mais l'éclairage, et je me répéte, il est mal placé en terme de conception, il doit être à l'exterieur de la surface de travail :
- il est susceptible de créer des turbulences dans ton flux
- il va rendre plus compliqué la désinfection de la zone de travail

Les tests que tu évoques sont toujours fait par des organismes indépendants. Ce n'est pas ce forcément ce critère qui valide la pertinence des résultats annoncés. Malheureusement les organismes indépendants sont payés pour faire ces tests, et c'est l'industriel qui paye. Tu vois certainement où je veux en venir.
Dans le métier que je fais, nous sommes audités en permanence par des organismes indépendants et je t'assure qu'il y a de tout dans ce domaine, le pire comme le meilleur.
Et la majorité des audits penchent toujours en faveur des intérêts du payeur, comme par hasard.

Allez, deux petits trucs :

- Pour calculer l'uniformité de ton flux laminaire : avec un anémomètre tu mesures la vitesse du flux en sortie de filtre à un maximum de points sur l'ensemble de la surface : zone centrale, zones périphériques haut/bas/gauche/droite
Sur l'ensemble de tes points de mesure tu fais une moyenne de la vitesse relevée, et si le résultat montre un écart de +/- 10% de la vitesse nominale (0.45m/s) signifie que ton flux n'est plus laminaire et la zone de travail sujette à contamination.

- Une fois ta hotte terminée, tu la mets en route, tu attends une demi heure et tu ouvres ta flasque (coulée depuis trois semaines au moins) dans la zone de travail, tu la laisses ouverte une vingtaine de minutes, tu la fermes et tu attends. Si au bout de 45 jours elle est toujours vierge de toute contamination, c'est gagné.

T'a bien raison de te lancer, le bricolage c'est génial et ça permet d'apprendre plein de trucs sur plein de trucs.

@ jbd : en théorie, la ventilation n'est pas nécessaire pour la germination et la formation de protocormes, donc tu n'as pas de souci à te faire. Mais c'est plus pour assurer la bonne croissance des plantules dans le temps. Ensuite les échanges gazeux et les différences de pression autorisés par l'aération évitent que la plante ne soit trop fragile en sortie de flacon.
Maintenant c'est certain, cela peut-être un facteur de contamination supplémentaire. Il y a des "pro" et des "anti"
Moi pour l'instant, j'ai choisi de partir sur du ventilé.
Comme le dit Cubzac (salut Jeff, ça boom ? ), pour la stérilisation, si tu n'as pas de mèches dans tes flacons il faut stériliser couvercle partiellement ouvert afin d'éviter l'éclatement, et le fermer quand tu sors tes bocaux/flacons de la cocotte.
D'autre part, on travaille en général avec un bec bunsen dans une hotte. A moins que l'ensemble de tes outils n'aient été préalablement autoclavés, tu es obligé de les flamber, même sous la hotte. Mais tu as raison, on n'est pas obligé de travailler aussi près.

Moogly, quand j'ai vu ton post je me suis dit "tiens, c'est rigolo ça" parce que je suis en train de réunir de quoi construire une hotte également, comme quoi tu vois...
Bon, en terme de dimension et de budget j'ai vu un peu plus large
Enfin bref, je vous montrerai tout ça un de ces quatre.

Pour ton filtre, tu mets un peu plus du double et tu as un filtre HEPA H14 avec certificat d'efficacité (chaque filtre est testé individuellement). Voici les tarifs France Air qui vendent aux particuliers (pour te donner une idée) :

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Merci, je regarde ca. Je sais que mon filtre ne vaut les vrai, mais je veux quand meme tester. Pour les prix c'est ceux que j'ai pu constater chez d'autre fabricant. Je vais faire comme tu m'a dit afin de tester la hotte une fois que je l'aurais termine. Je modifie aussi la position de l'eclairage.
Merci pour c'est conseil. Ah oui ou trouve tu ton materiel pour la civ (flacon, tube a essai,...)? Et avec quoi tu desinfecte tes graine? Hypochlorite? Si oui ou en trouve tu?

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de toutes façons même sous une hotte a flux laminaire il faut apprendre a faire les bons gestes sinon on contamine : c'est exactement comme autour d'un bec bunsen...

Même sous une hotte pro au début il faut pas mal en faire pour développer les bons automatismes et arrêter de contaminer, donc a moins que tu ai appris a bosser sous hotte en labo et que tu en fasses souvent il me semble difficile d'acquérir ces automatismes en faisant 1 semis tous les 36 du mois

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Si vous débutez foncez lire la page foire aux questions : la réponse s'y trouve peut être...

Merci laurence, je demanderai a ma soeur de m'apprendre elle bosse sous hotte lol. Je sais qu'il faut apprendre et je ne demande que ca, je m'entraine autour d'une flamme en ce moment pour apprendre les geste et technique a faire. Si je refait la meme chose sous hotte je devrai avoir de bon resultat. Faut pas me decourager lol.

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Pour ton matos, évite à tout prix les pseudo "kits". C'est hors de prix et te permet très peu de manipulation vu les quantités fournies. Tu vas te ruiner pour pas grand chose.

-Hypochlorite de calcium :
Je l'achète chez Piscine Azur, conditionnement 1kg, un peu moins de 15€.
C'est un produit dangereux à manipuler et surtout à stocker avec précaution :
Au frigidaire, et bien fermé. Ca craint chaleur et humidité. Et c'est extrèmement agressif pour la peau et les muqueuses.

ICI


Utilisation : 5g/100ml d'eau distillée bien agiter, laisser reposer une dizaine de minutes, puis filtrer sur filtre à café. Attention ! C'est pire que l'eau de javel question décoloration. Evite de porter ton t-shirt préféré.

- Le matériel, chez Jeulin. Pour commencer tes semis je te recommande les flacons suivants. Pas cher et bien étanches, les capuchons sont auto jointants. Un peu plus de 7€ les 10 flacons, ils passent très bien à la cocotteminute. Ils vendent aussi des pinces, et des tubes pas cher et surtout en petit conditionnement.



- Les milieux de culture je les achète là : The Orchid Seedbank Project
Le P668 est très bien pour à peu près tout : semis, repiquage. Et à peu près pour toutes les espèces (1/2 charge pour les paphios). Les frais de port sont raisonnables et les produits d'excellente qualité pour leur coût.
Seul inconvénient, Aaron Hicks prend son temps, compte trois semaines de préparation de la commande et huit jours pour l'expédition
Bref, s'y prendre à l'avance et ne pas être pressé.



Voilà, voilà. Après rigueur, patience et méthode feront le reste.

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Merci, j'ai deja commande du matos chez clivia mais je n'avais pas assez de flacon et je trouvais leur flacon asser cher. Pour le milieu que tu prend tu rajoute de l'agar dedans ? Il y a une procedure de preparation avec?

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Bon, je vais éviter de parler de Clivia, ça vaut mieux.

Ce milieu-là contient déjà l'agar (c'est marqué dessus, comme pour le célèbre fromage).

Tous les milieux se valent en terme de conservation et de préparation :
Déjà ça se garde au frigidaire, bien protégé de l'humidité, ensuite il est en général indiqué pour quel volume final la dose est prévue. Ici c'est pour 1l
Je chauffe donc 1l d'eau distillée, au micro-onde, jusqu'à ce qu'elle bouillonne. Je sors mon récipient, j'attends quelques secondes que ça cesse de remuer et je verse ma dose de milieu.
Après je fouette pendant 10 ou 15 minutes (le fouet de cuisine, c'est ce que j'ai trouvé de mieux pour bien homogénéiser ma préparation) et si ça refroidit trop vite je repasse un coup au micro-onde mais sans faire bouillir. Je chauffe juste.

Il faut bien 10 ou 15 minutes pour que l'agar soit bien dissout, donc ne lésine pas sur le temps. Sinon tu vas avoir des pots qui prendront et d'autres moins, parce que la répartition de l'agar se sera mal faite.

Et surtout tu remues bien après avoir coulé chaque flasque, sinon, c'est pareil, la consistance de la gélose ne sera pas équivalente pour chaque bouteille.

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D'accord, bon ne parle plus de clivia. Merci pour tout damas je vais commande mon milieu chez orchid seedbank il est vraiment pas cher. Et mes flacon chez jeulin. Une dernier question apres j'arrete de t'embeter, sur le bouchon du flacon tu perce un trou pour mettre le coton ?

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Hi Marion, ça boume! on peut pas mieux, la semaine derniere j'ai voulu arreter l'ebullition dans mes fioles , apres sterilisation ........avec de l'eau froide , deux ont pété envoyant des eclats de verre dans tout l'appart! c'est trés dangereux il ne faut pas le faire vous pouvez perdre un oeil voire les deux et meme pire .....
donc opération fortement déconseillée, comment va ton Sangii x sib , il m'intrigue celui là, j'en ai 4 en cours et j'attends un paphio multi en rouge avec maudiae vinicolor en pod mother, c'est bien engagé dans 4 mois on verra!
Moogly , il me semble que ta motivation sera la clé de ton succés , c'est tout le mal que je te souhaite