Orchidouxdingues
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Démonstration In vitro
https://orchidouxdingues.info/viewtopic.php?f=26&t=16979		 Page 1 sur 2
Auteur:  masdevallia [ Jeu Déc 10, 2009 4:59 pm ]
Sujet du message:  Démonstration In vitro
J'ai fais quelques tests concernant les graines et méristèmes (de phalaenopsis) en culture sur gélose "maison" mais c'était vraiment pour m'exercer. :stir:
Bien entendu, comme toute débutante, mes expériences ont échouées car je n'ai ni les bons ingrédients ni la bonne technique pour réaliser tout ça. :mrgreen:

Je sais que certains d'entre vous obtiennent de bon résultats en semence de graines d'orchidées donc voici ma question :

Est-il possible de nous faire une petite démonstration lorsque vous procéderez à nouveau à une manipulation "In vitro" ? :oops:
Auteur:  doudou47 [ Jeu Déc 10, 2009 5:06 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
il y a le sujet de Benoit (Poliben) qui traite de ça!! j'ai le même probleme en fait les 2 fois ou j'ai testé , au bout de quelques jours il y a prolifération de champignon, donc en fait probleme d'asseptie...
Auteur:  Poliben [ Jeu Déc 10, 2009 8:00 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Hello :)

Merci Doudou de penser à moi :) Il y a effectivement mon mini reportage que j'ai tenté de faire sur le semi et la culture de méristem.
http://www.orchidouxdingues.info/viewtopic.php?f=5&t=12205&hilit=neofinetia

Qu'entends tu par démo ? Tu veux dire en live ? Sinon, on a évoqué avec Laurence la possibilité de rédiger un article pour l'Orchigazette du site ... mais comme je suis un gros flemmard :oops: je n'ai pas encore commencé ... depuis le mois de septembre :roll: Promis je vais me pencher dessus !

@+
Benoit
Auteur:  orchidsworld [ Jeu Déc 10, 2009 9:21 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Poliben a écrit:
mais comme je suis un gros flemmard :oops: je n'ai pas encore commencé ... depuis le mois de septembre


Ben tiens... :P :P j'attends qqch aussi :wink:
Auteur:  masdevallia [ Jeu Déc 10, 2009 11:32 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Poliben, j'avais déjà visualisé ton mini reportage, très interressant d'ailleurs :wink:
Mais je parle effectivement de démonstration en live pour voir véritablement toutes les étapes, de stérilisation, de préparation des graines...de fabrication de gélose et tout et tout.... :ok:
Auteur:  DV [ Jeu Déc 10, 2009 11:49 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Pour la technique de base (mais utilisant une hotte sterile) de propagations a
partir de graines il y a le cours suivant en englais, illustre avec des photos:
http://www.amazon.com/gp/product/0972227008

Ca reste quand meme complique et pas quelque chose de faisable sur un coin de
cuisine mais pour ceux interesse, il y a toute la description des protocoles,
composition des milieux et meme temps moyen de murissement des gousses
pour pas mal d'especes.

Daniel
Auteur:  Poliben [ Jeu Déc 10, 2009 11:50 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Alors je peux te conseiller d'aller voir ce site, j'ai commencé avec lui :

http://orchideenvermehrung.at/english/index.htm
Auteur:  masdevallia [ Ven Déc 11, 2009 10:46 am ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Poliben a écrit:
Alors je peux te conseiller d'aller voir ce site, j'ai commencé avec lui :

http://orchideenvermehrung.at/english/index.htm


Ce site est vraiment très interressant...du coup j'ai fécondé un phal. pour refaire une tentative avec des graines :P
Je vais en profiter pour faire moi aussi un ptit reportage sur cet essai :wink:
J'ai 8/9 mois pour acheter le matériel necessaire...je pense que j'aurais assez de temps :hihihi:

DV a écrit:
Pour la technique de base (mais utilisant une hotte sterile) de propagations a
partir de graines il y a le cours suivant en englais, illustre avec des photos:
http://www.amazon.com/gp/product/0972227008

[...]

Daniel


Sur le web, l'anglais ne me dérrange pas car il y a les traductions mais pour un livre, même avec quelques notions d'anglais, je crains de ne pouvoir comprendre l'intégralité des textes :wink:

Merci pour vos réponses. On avance :yipi:
Auteur:  jbd [ Ven Déc 11, 2009 3:20 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
J'ai trouvé ces liens sur le web.
http://www.clivia.fr/catcom2.htm
http://pagesperso-orange.fr/orchidee_54/page/CIV/pageciv.html

Je pense que je vais me lancer dans l'aventure car j'ai une gousse de Phals qui va bientot être OK.

Questions pour Poliben :
- y-a-t-il un moyen simple de se rendre compte si des graines sont stériles ou pas, sans utiliser de loupe binoculaire (que je n'ai pas) ?
- ou achètes-tu tes milieux de culture (j'magine que tu ne les fais pas toi-même) ?
Auteur:  masdevallia [ Ven Déc 11, 2009 4:32 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
pour les milieux de culture il y a : http://membres.lycos.fr/acroleine/ :)
Auteur:  orchidsworld [ Ven Déc 11, 2009 6:30 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
masdevallia a écrit:
pour les milieux de culture il y a : http://membres.lycos.fr/acroleine/ :)


Qui a déjà essayé ce kit ? Benoît peut-être ? Ca vaut la peine ou le prix est exagéré ?
Auteur:  doudou47 [ Ven Déc 11, 2009 7:07 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
moi il ne m'on jamais repondu....
Auteur:  jbd [ Ven Déc 11, 2009 11:53 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Je ne sais pas si quelqu'un a déjà mentionné ce lien :
http://encyclo.free.fr/pages/in_vitro.htm

et celui la :
http://www.aaoe.fr/post/2006/11/17/La-culture-in-vitro

et encore ceux la pour l'achat du milieu de culture et des materiels :
http://pagesperso-orange.fr/technivit/boutique.htm
http://www.natureetpaysages.fr/v2/product.php?id_product=738
Auteur:  doudou47 [ Sam Déc 12, 2009 11:33 am ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
a mon avis le plus difficile n'est pas de trouver les produits, c'est plutot d'arriver à produire le milieu stérile de la zone travail, enfin c'est là tout mon problème... :roll:
Auteur:  flupke [ Sam Déc 12, 2009 11:41 am ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
On trouve les milieux de culture sur eBay. :wink:
Auteur:  Poliben [ Sam Déc 12, 2009 4:21 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
jbd a écrit:
Questions pour Poliben :
- y-a-t-il un moyen simple de se rendre compte si des graines sont stériles ou pas, sans utiliser de loupe binoculaire (que je n'ai pas) ?
- ou achètes-tu tes milieux de culture (j'magine que tu ne les fais pas toi-même) ?


Désolé, je n'ai pas eu le temps de répondre plus tôt ;)
Il existe des colorants qui vont colorer spécifiquement les noyaux des cellules mais je ne pense pas qu'un particulier puisse avoir accès à ce genre de produit.

Je fais commander mes milieux chez Sigma (P6668) par le labo ou je bosse puis je le rembourse. Sigma-Aldrich ne vend pas aux particuliers. Les tarifs que tu as trouvés sont au minimum 2 fois plus cher que Sigma. et 5.00 € pour 200 ml de milieux c'est carrément prohibitif.
Auteur:  orchidsworld [ Sam Déc 12, 2009 4:50 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Poliben a écrit:

Désolé, je n'ai pas eu le temps de répondre plus tôt ;)
Il existe des colorants qui vont colorer spécifiquement les noyaux des cellules mais je ne pense pas qu'un particulier puisse avoir accès à ce genre de produit.

Je fais commander mes milieux chez Sigma (P6668) par le labo ou je bosse puis je le rembourse. Sigma-Aldrich ne vend pas aux particuliers. Les tarifs que tu as trouvés sont au minimum 2 fois plus cher que Sigma. et 5.00 € pour 200 ml de milieux c'est carrément prohibitif.


T'emploierais quoi pour colorer le noyau ? Bleu de méthylène ? Lugol ?

Et comme milieu, tu emploies seulement le P6668 ou tu as aussi essayé les autres (Knudson, P1056 et autres )
?
Auteur:  jbd [ Jeu Déc 17, 2009 1:15 am ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
Poliben a écrit:
Il existe des colorants qui vont colorer spécifiquement les noyaux des cellules mais je ne pense pas qu'un particulier puisse avoir accès à ce genre de produit.

Donc pas de moyens simples... Avec un microscope, on peut voir quelque chose ?

Poliben a écrit:
Je fais commander mes milieux chez Sigma (P6668) par le labo ou je bosse puis je le rembourse. Sigma-Aldrich ne vend pas aux particuliers. Les tarifs que tu as trouvés sont au minimum 2 fois plus cher que Sigma. et 5.00 € pour 200 ml de milieux c'est carrément prohibitif.

Et avec ce lien là, est ce que c'est le meme P6668 ?
http://orchidees.jimdo.com/boutique/mat%C3%A9riels/in-vitro/
Auteur:  Poliben [ Jeu Déc 17, 2009 4:53 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
@François : Pour le colorant, je ne me souviens pas. Il faudrait que je demande aux cytologistes du labo ;)
Sinon pour le milieu je me serts du Phytamax P6668 comme base et je modifie la recette en fonction de ce qui est décrit sur bigleaf ou the hybridizersforum.

@Jbd : un microscope a un pouvoir grossissant bien supérieur à une loupe binoculaire donc ça peut être utilisé. Et sinon, oui le milieu est bien celui-ci ;)
Auteur:  Etienne [ Sam Déc 19, 2009 9:38 pm ]
Sujet du message:  Re: Démonstration In vitro
jbd a écrit:
Poliben a écrit:
Il existe des colorants qui vont colorer spécifiquement les noyaux des cellules mais je ne pense pas qu'un particulier puisse avoir accès à ce genre de produit.

Donc pas de moyens simples... Avec un microscope, on peut voir quelque chose ?


tu n'as pas besoin de de colorant spécial pour voir si tes graines sont stériles. Un coup d'oeil au microscope (ou une forte bino) et si tes graines sont "dodues" (en raison de la présence de l'embryon, une petite "boule"), c'est bon. les graines stériles sont vides.
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