Orchidouxdingues
https://orchidouxdingues.info/

Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
https://orchidouxdingues.info/viewtopic.php?f=26&t=27441		 Page 1 sur 3
Auteur:  franck b77 [ Ven Nov 04, 2011 9:22 pm ]
Sujet du message:  Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Dans le but de réaliser quelques clonages et semis, je me suis fabriqué un isolateur (aussi appelé "boîte à gants" ou "glovebox").

J'ai choisi cette solution pour les raisons suivantes :
- peu onéreuse
- pas de feu lors des manipulations (donc risques d'incidents domestiques réduits)
- la possibilité de prendre tout son temps sans se presser lors des manipulations

Mes premières manip' datent de septembre et je suis très satisfait pour le moment. 2 flacons contaminés sur un total de 11 (dont une contamination due à l'explant lui-même).

Voici les photos. Je donnerai quelques explications plus tard si on m'en demande. Le matériel de base est une boîte de rangement de 46 litres de marque Auchan, un raccord en PVC pour tuyaux de 10 cm scié en 2 (pour passer les avant-bras), une paire de gants en nitrile avec longues manchettes (longueur totale de 43 cm) taille 10 et une plaque de verre.

Image

Image

Image

Image

Image

Image

Image

Image

Image

Image

Image

Franck.
Auteur:  perok68 [ Ven Nov 04, 2011 9:40 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Et donc ? Comment on arrive à avoir de l'air strérile dedans ? :)
Auteur:  mistersheep [ Sam Nov 05, 2011 12:32 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
joli montage :wink: ... très propre en tout cas

c'est vrai qu'il y a surement moyen de tout désinfecter mais pour l'air qui se trouve à l'intérieur je me demande aussi??
Auteur:  franck b77 [ Sam Nov 05, 2011 2:15 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Je prépare une solution d'eau de Javel du commerce (celle vendue en bidon de 2 litres) diluée à 50 % (par exemple 10 cl d'eau de Javel + 10 cl d'eau du robinet) additionnée de quelques gouttes de liquide vaisselle.
Couvercle placé sur la boîte (la plaque de verre reste en place jusqu'à la fin du semis et rebouchage des flacons), je pulvérise cette solution sur les parois internes de la boîte et sur tout ce qu'elle contient (gants, flacons, pince, ...) et j'attends 20 minutes qu'elle fasse son effet. Ensuite, on peut déboucher les flacons et semer des graines ou planter des fragments végétaux.
Auteur:  loloparis18 [ Sam Nov 05, 2011 6:06 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
C'est une super idée pour un prix dérisoire, cela m'intéresse énormement d'autant que je voudrais pratiquer la multiplication par méristème de phalaenopsis violacea en particulier. Mais après il faut avoir les bases pour la différenciation et la croissance des protocorme. Donc j'aimerai en savoir plus si tu veux bien.
Auteur:  paphios59 [ Sam Nov 05, 2011 8:58 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Merci beaucopup franck!!!

Mais comment fixer les gants???
Encore merci

Jules
Auteur:  franck b77 [ Sam Nov 05, 2011 11:42 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
@ loloparis18 : Oui le coût est bas. 15 euros pour la caisse en polypropylène, 20 euros pour la plaque de verre, ... Le plus cher, c'est la paire de gants car je n'ai trouvé mon bonheur que sur le net et j'ai dû payer pas mal de frais de port (alors que les gants ont été livrés dans une simple enveloppe). J'utilise le milieu de clonage distribué par Damas via son site Phytorchid. Du P793 Orchid multiplication medium d'après l'étiquette qui est sur le sachet. J'obtiens une réaction positive sur les noeuds de hampes de phal. Je n'ai pas de réaction sur des pointes racinaires de phal. Mais je m'y prends peut-être mal avec ce type de clonage. Damas a déjà eu une réaction sur des pointes. Je ferai du clonage à partir de pointes racinaires le sujet d'un prochain post car j'aimerais progresser sur cette technique très intéressante pour cloner des monopodiales.

@paphios59 : Jules, les gants sont retenus par des colliers en inox coupés sur mesure. On voit bien le système de serrage par vis sur les photos. Pour l'instant, ces colliers résistent bien à l'eau de Javel qui est très oxydante (transforme le fer en rouille).
Auteur:  estelle [ Sam Nov 05, 2011 11:43 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Super ton installation Franck ! :bav:
Avec ça tu vas faire des merveilles !
Mes graines t'attendent.
Auteur:  franck b77 [ Sam Nov 05, 2011 11:50 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
estelle a écrit:
Avec ça tu vas faire des merveilles !


J'espère ! Les résultats des premiers clonages de hampes de phal sont encourageants. Alors pour les semis, ça devrait rouler :hi:
Auteur:  loloparis18 [ Dim Nov 06, 2011 12:11 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Merci Frank,

Cela me donne vraiment envie de le faire car j'ai des phal violacea que j'aimerai bien multiplier car ils sont beau dont 2 violacea coerulea et un violacea "dark select" à tombé vu l'intensité du violet.
Auteur:  Luis Jean-Yves [ Dim Nov 13, 2011 7:43 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
super bravo Franck
j'ai hâte de voir la suite
JYL
Auteur:  Ulysse21 [ Dim Nov 13, 2011 10:15 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
C'est pas mal mais comment tu mets ton matériel dedans si la vitre est tout le temps fermée ?
Auteur:  franck b77 [ Ven Nov 18, 2011 12:50 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Non Ulysse, la boîte n'est pas toujours fermée. La vitre qui fait office de couvercle est amovible.
Je l'enlève pour mettre tout le nécessaire (pulvérisateur avec solution désinfectante, flacons, pince, fragments végétaux ou graines, ...) dans la boîte. Une fois que je suis sûr de n'avoir rien oublié, je pose la vitre (sur laquelle un joint de silicone a été posé) sur la boîte, je passe mes mains dans les gants (2 tailles de plus que mes mains pour pouvoir les y glisser sans difficulté), j'attrape le pulvérisateur et je stérilise tout ce qui est dans l'isolateur (parois internes de l'isolateur, la vitre (en même temps, ça évite l'apparition de buée), parois externes des flacons, des gants, la pince ou spatule, ...).
Après utilisation du pulvérisateur, je retire mes mains des gants et j'attends 10 à 20 minutes que la Javel fasse son effet. Bien sûr la vitre reste en place.
Après les 10 à 20 minutes, je plante les fragments végétaux ou je sème. Je n'ai pas encore fait de semis mais cela ne va pas tarder. Par contre j'ai déjà mis en route des clonages de phalaenopsis en septembre. J'ai des plantules avec une ou deux feuilles et des racines qui commencent à se former.

@ Jean-Yves : Je vais essayer de mettre rapidement des photos de mes petits clones.

Voici un lien vers la doc technique du milieu de propagation que j'utilise : http://www.phytotechlab.com/TechInfo/P793-Info.pdf
Apparemment le produit donne une réaction sur les phal, cattleya et cymbidium. Il est possible qu'il soit actif sur d'autres genres.
Auteur:  mistersheep [ Ven Nov 18, 2011 10:58 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
et pour l'ouvrir ensuite il faut utiliser la lame d'un cutter pour couper le joint de caoutchouc ?
Auteur:  franck b77 [ Sam Nov 19, 2011 12:39 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Non non, l'utilisation de l'isolateur serait bien trop fastidieuse. Le joint est permanent.
Regarde bien les 3 dernières photos de mon premier message. On y voit la vitre posée droite (avec son joint) dans l'isolateur et la vitre posée à plat sur l'isolateur avec son joint en contact avec le rebord de l'isolateur.

Le joint est en silicone. Pas besoin d'acheter une cartouche. Un tube de silicone suffira amplement.
L'isolateur est en PP (polypropylène). Le silicone n'y adhère pas ou seulement très peu. Le joint ne peut donc être directement posé sur le rebord de l'isolateur. Il faut donc le poser sur la plaque de verre sur laquelle il adhère très bien (tous les fabricants d'aquarium le savent bien).
Lors de la pose du joint, j'ai placé la plaque sur l'isolateur pour pouvoir suivre le contour du rebord de la boite. Ensuite, j'ai attendu que le joint commence à sécher (on peut déposer un échantillon de silicone sur un bout de papier ou de plastique pour pouvoir en estimer le temps de séchage en surface et à coeur en tatant de temps en temps avec le doigt) tout en restant bien moelleux. A ce moment-là, j'ai retourné la vitre sur la boite pour mettre le joint en contact avec son rebord. Le joint étant bien moelleux, il s'est aplati sous le poids de la plaque de verre en épousant la surface du rebord de la boite. 24 heures après, le joint était sec, la vitre pouvait être soulevée, la pose du joint était terminée.
Auteur:  Ulysse21 [ Sam Nov 19, 2011 9:40 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Donc en fait, le silicone ne sert qu'a faire un coussin étanche ?

Ca a l'air beaucoup mieux que ma première impréssion ou il fallait changer le joint a chaque fois, très pratique, surtout pour faire des clonages de méristème.

Là ou j'avoue ne rien comprendre (surtout a cause de l'anglais), c'est pour faire le milieu nutritif ... mais c'est HS :wink:

Juste pour demander, la javel n'est pas vraiment toxique pour les plants ? de l'alcool ne serait pas mieux (le méthanol préenterait un danger pour nous lors de l'ouverture de la boite :? )
Auteur:  franck b77 [ Dim Nov 20, 2011 6:41 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Ulysse21 a écrit:
Donc en fait, le silicone ne sert qu'a faire un coussin étanche ?

Tout à fait !

Les flacons ressortent de la boite à gants pleins d'un air chargé de vapeur de Javel. Mais cela ne semble pas affecter le développement des plants à l'intérieur des flacons.
En remplacement de l'eau de Javel, on devrait en effet pouvoir utiliser de l'alcool ménager à 90% (méthanol presque pur). Il faudrait faire quelques essais pour juger de son efficacité antiseptique. En ce qui concerne sa toxicité, je pense qu'il faut en respirer pas mal ou être en contact cutané prolongé avec pour commencer à avoir des problèmes de santé. Moyennant une bonne ventilation du local, je pense qu'on peut travailler avec ce produit sans aucun risque.
Auteur:  paphios59 [ Mar Nov 22, 2011 7:33 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Bonjour franck!

Est-ce que ça peut le faire avec des gants de vaiselle en latex???

Jules
Auteur:  franck b77 [ Jeu Nov 24, 2011 1:34 am ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
Salut Jules,

Le problème des gants en latex, c'est la difficulté à les enfiler et la même difficulté à les enlever.
Mais étant donné ton jeune âge, tes mains n'ayant pas encore atteint leur taille adulte, tu devrais pouvoir utiliser ce genre de gants. Prends les une taille ou deux au-dessus de celle de tes mains de façon à pouvoir les enfiler et les ôter sans difficulté. Peut-être qu'un peu de talc sera aussi utile. Et pense aussi à choisir des gants avec de longues manchettes, histoire de pouvoir travailler avec un minimum de confort.
Auteur:  paphios59 [ Jeu Nov 24, 2011 8:50 pm ]
Sujet du message:  Re: Culture in vitro : fabrication d'un isolateur.
C'est exactement ce que j'ai!!!! :hehe: :hehe: :hehe:

ça sent les mini orchidées!!! étant donné que Damas va m'envoyer des milieux de semis déja près dosés en agar, je n'aurais plus qu'a dissoudre et touiller!!! :yipi: :yipi: :yipi: :yipi: :tchin:

Merci beaucoup! :biz:


Jules
Page 1 sur 3 Heures au format UTC + 1 heure [ Heure d’été ]
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group
http://www.phpbb.com/