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Mes débuts en culture in vitro https://orchidouxdingues.info/viewtopic.php?f=26&t=38880 |
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Auteur: | alaind52 [ Lun Juil 14, 2014 7:55 pm ] |
Sujet du message: | Mes débuts en culture in vitro |
Bonjour, Tout d'abord, je m'excuse auprès des spécialistes dans ce domaine car, au risque d'être ennuyeux, je vais tout vous raconter depuis le début du début... Pour info, je mettrai les photos après les explications. J'ai commencé en essayant le semis de graines achetées mais, pour le fun, j'ai aussi croisé quelques phalaenopsis hybrides sans noms pour voir si cela fonctionnait. Ces plantes très volontaires fleurissaient sans arrêt et les possibilités étaient multiples. Non seulement les fécondations ont "pris" mais certains croisements ont germé. J'ai fait le choix du matériel suivant la place disponible (je vis en appartement) et les moyens financiers. Après pas mal de lectures d'avis du forum et d'articles sur le sujet, j'ai décidé d'opter pour la glove box décrite sur le site de Patrick Polbos où j'ai trouvé les gants, par ailleurs. J'ai acheté la "boîte" chez un fournisseur nordique de mobilier et de décoration bien connu et les accessoires dans un centre de bricolage. Avant de semer, il fallait passer le stade du milieu stérile. J'ai commandé les produits au département de botanique d'une université belge et j'ai fait le premier mélange. Les bocaux avec le milieu ont été stérilisés avec une marmite à pression, couvercles pas fermés à fond, pendant 30 minutes à partir du sifflement de la sécurité. J'ai fermé les pots dès la sortie et les ai laissé de côté pendant 4 à 6 semaines. Après ce délai, ne voyant aucune moisissure, j'en ai conclu que c'était OK... J'ai commandé les premières graines via internet en Asie et j'ai opté pour la désinfection à l'hypochorite de calcium. Là, pas facile... certains articles diffèrent quant à la concentration et même à l'université, on m'a répondu d'essayer avec une concentration et de modifier si cela ne fonctionnait pas bien de manière à trouver la concentration adéquate suivant les graines. Quant on a pas trop de graines à semer, c'est pas très "jojo". De plus, les graines qui flottent ou qui coulent, pas toujours facile de les récupérer non plus. Enfin, j'ai semé dans 12 bocaux. Résultat : 8 ont présenté des moisissures après 4 à 6 mois et les 4 derniers n'ont toujours pas de moisissures mais rien n'a germé après 10 mois. Un peu déçu bien sûr mais toujours motivé. Je me dis que soit les graines n'étaient plus fertiles pour les derniers, soit la concentration de désinfectant était trop forte. Pour les 8 pots jetés, je suppose que c'était le contraire, concentration trop faible. Après les premiers pots jetés, j'ai décidé de commander des graines en Allemagne, toujours via internet. C'était une série de graines de Laelia de diverses variétés (L. purpurata, L. lobata...) en un lot. Entre temps, j'avais découvert, sur un forum anglais, un article relatif à la désinfection aux vapeurs d'hypochlorite de sodium. De plus, les gousses de mes croisements commençaient à bien gonfler et je gardais l'espoir de pouvoir semer des gousses vertes, enfin presque à maturation mais non ouvertes. J'ai aussi commandé des pots en plastique stérilisables car j'avais remarqué que les couvercles des bocaux avaient tendance à développer les moisissures via des points de rouille après semis. J'ai refait une douzaine de pots en plastique (petits et moyen, bas et plus hauts, ayant lu que le risque d'infection était plus faible dans les petits contenants) avec le même milieu et j'ai attendu quelques semaines. J'ai semé dans la glove box mes graines de Laelia avec la méthode de vapeur de javel à 5 %. Les Laelia purpurata mandayana ont germé après 3 mois et les Laelia lobata après 6 mois. Sur la douzaine de pots, un seul a présenté de la moisissure après 8 jours de semis et les Laelia lobata "Jeni" n'ont toujours pas bougé. Il y a un mois, j'ai "repiqué" les premiers Laelia et c'est fou ce que ça grandit plus vite ensuite. Les gousses des croisements de "fun" sont arrivées à maturité après 7 à 10 mois. Le semis "vert" est plus simple puisqu'il ne faut pas désinfecter les graines, mais il faut faire attention de ne pas semer trop de graines car les gousses sont bien remplies. Par contre ici, le germination s'est faite en 4 semaines, peut-être parce que les graines étaient "fraîches"... Là aussi, j'ai fait un premier repiquage dans le même milieu que les semis. Pour la prochaine transplantation, il faudra que je revois quel milieu utiliser. Voilà pour le moment. L'aventure continue car il y encore tant à découvrir. Je trouve cela très excitant. La suite peut-être dans un post futur. Voici les photos (désolé pour la netteté de celles des germinations, pas facile d'avoir de bonnes photos) : Gousse de croisement de Phalaenopsis ![]() Graine au microscope ![]() Ma glove box maison ![]() Germination de Laelia ![]() ![]() Amicalement |
Auteur: | ossares [ Mar Juil 15, 2014 9:38 am ] |
Sujet du message: | Re: Mes débuts en culture in vitro |
Salut ! Très intéressant ton post. Je me permets de te poser une question en relation avec mon sujet d'hier : Comment sais-tu lorsqu'un fruit arrive à maturité ? |
Auteur: | jeriko [ Mar Juil 15, 2014 9:46 am ] |
Sujet du message: | Re: Mes débuts en culture in vitro |
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Auteur: | alaind52 [ Mar Juil 15, 2014 10:45 am ] |
Sujet du message: | Re: Mes débuts en culture in vitro |
ossares a écrit: Salut ! Très intéressant ton post. Je me permets de te poser une question en relation avec mon sujet d'hier : Comment sais-tu lorsqu'un fruit arrive à maturité ? Bonjour, J'essaie de les surveiller régulièrement. Lorsqu'une gousse commence à changer de couleur et qu'elle devient tendre à une légère pression entre les doigts, j'estime qu'elle va s'ouvrir et qu'elle est bonne à semer sans désinfection des graines. Je dis "changer de couleur" car, en général, elles jaunissent quelque peu. Mais, j'ai eu une gousse sur un Phalaenopsis mauve qui est restée d'un ton bordeaux jusqu'à la fin et qui s'est ouverte subitement sans changer de couleur. Cela étant, elle commençait à se rider quelque peu et cela aurait me mettre la puce à l'oreille. Dans le cas de Disa par exemple, j'ai remarqué que la gousse peut aussi se tordre un peu avant l'ouverture, mais je ne sais pas s'il faut généraliser. |
Auteur: | ossares [ Mar Juil 15, 2014 11:07 am ] |
Sujet du message: | Re: Mes débuts en culture in vitro |
Un grand merci pour ta réponse. Cela fait depuis février que les fleurs ont été fécondées, actuellement les deux fruits sont ridés mais n'ont pas changé de couleur. Je vais tester leur fermeté pour voir... Merci encore ! |
Auteur: | ion-ion [ Jeu Juil 17, 2014 8:55 pm ] |
Sujet du message: | Re: Mes débuts en culture in vitro |
Super tes germinations ! J'ai hâte de voir la suite de ton travail ![]() |
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