Orchidouxdingues

Bonjour à tous !

Je me décide à faire un sujet sur mes tentatives de semis in vitro.
Ayant la chance d'avoir à disposition de belles installations au travail (laboratoire de CIV avec hotte à flux laminaire, autoclave, chambre de culture !), j'ai commencé à faire mes croisements en début d'année avec une capsule de Phalaenopsis hybride violet arrivée à therme en septembre.




J'ai récolté les graines dans un petit tube



Et je me suis lancée dans l'aventure du semis in vitro ce matin !

Avec comme milieux des variations trouvées par ci par là, un protocole utilisé pendant ma licence professionnelle et les conseils d'un ami qui fait régulièrement de la CIV sur vanille à la Réunion

Donc dispositif !

Milieux de culture :
- MS + vitamines MS + 30 g/L saccharose
- MS + vitamines Camborg + 30 g/L saccharose
- MS + vitamines MS + 20 g/L saccharose
- MS + vitamines Camborg + 20 g/L saccharose
- MS 1/2 + vitamines MS + 20 g/L saccharose
- MS 1/2 + vitamines Camborg + 20 g/L saccharose
- Knudson (en attente de réponse sur la composition du milieu commandé tout prêt).

Stérilisation :
1-> - Nettoyage des graines dans eau stérile + quelques gouttes de Tween (je n'avais pas de Triton : détergeant) 5 minutes minimum
- Surnageant vidé (les graines restent au fond)
- Hypochlorite de calcium à 1.25 % pendant 3 minutes
- Surnageant vidé
- 3 rinçages à l'eau stérile

2-> - Hypochlorite de calcium à 2.5 % pendant 3 minutes
- Surnageant vidé
- 3 rinçages à l'eau stérile

3-> - Hypochlorite de calcium à 3 % pendant 3 minutes
- Surnageant vidé
- 3 rinçages à l'eau stérile


Après la stérilisation, j'ai fait le semis (à la spatule) en tube dans lesquels le milieu a été solidifié en pente après passage à l'autoclave



Résultats, ce matin j'ai semé 74 tubes avec seulement la moitié de mes graines ! J'attends d'avoir un retour déjà sur les contaminations avant de me lancer dans le semis du reste de mes graines de cette gousse. Je les mets au noir pendant quelques jours et après hop sous les lumières de la chambre de culture de 32 m² ! Je vais pouvoir en faire des semis

J'ai reçu de la part de certains Orchidouxdingues d'autres graines de Phalaenopsis et bientôt Paphiopedilum, donc affaire à suivre !

Eh bé dis, ca rigole pas chez toi !
J'espère que tu vas vite voir les résultats de ton travail

Tu utilises un filtre genre filtre à café pour la stérilisation ?

Beau travail ... il faut attendre maintenant !
Perso je ne rince jamais, j'ai peut-être tort ! Au fait, les graines de Phalaenopsis n'apprécient pas l'hypochlorite, on conseille de désinfecter à l'eau oxygénée après trempage dans solution eau sucrée. Pour les Phalaenopsis je préfère semer en vert pour ces raisons.

Eh hé oui j'ai vu grand, mais bon

Pour l'hypochlorite, mon professeur de licence pro à toujours fait comme ça et il n'a jamais eu de souci particulier, on est même tous repartis avec nos plantules à la fin de l'année Et mon ami de La Réunion a de bons résultats aussi Merci pour ton autre technique ! C'est vrai que semer en vert c'est plus pratique et plus sûr On verra pour les prochaines gousses !

En attendant petite photo (floue ) de mes graines semées vendredi qui ont bien gonflé





A suivre !

Bonjour,

Quelques news de mes avancées !
Semis de 150 tubes au total, passage d'une semaine dans le noir et mise à la lumière à 25°C !

Et tadam !




Prochaine étape semis de Paphiopedilum et Bletillia striata !

Ca se développe très vite chez toi ... en comparaison des miens !

Ah oui ? Les tiens sont plus lents ? Tu les as sur quel milieu et quelles conditions ? Tu les a passées au noir pour la germination ?

Alors pour le milieu : P668
Pour les conditions : lumière naturelle depuis le début ; on m'avait conseillé de ne pas les mettre dans le noir
Et température ambiante de la pièce (20 à 25° en ce moment).

Moi, ils sont gros comme des têtes d'épingles, et encore, pour les plus vigoureux !

Ce week-end, je vais semer mes graines de Miltoniopsis et je vais les confiner dans le noir une semaine...

OK hi hi, moi j'ai suivi les conseils d'un de mes anciens profs et d'un ami qui travaille la vanille à La Réunion

Et je n'ai pas du tout utilisé le P668 pour les Phalaenopsis, c'est peut-être ça aussi

Tu as utilisé quoi comme milieu ?

Ce qu'il y a écrit dans le premier message

Génial Félicitations !

Allez, quelques photos de mes graines de Phalaenopsis semées le 26 septembre !

J + 20


J + 25





On attend la suite !

Bravo !

Ça évolue bien, bon courage pour la suite

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L’expérience est une lanterne que l'on porte dans le dos et qui n'éclaire que le chemin parcouru.
^_ Confucius

C'est beau

Merci

Tout va bien

Intéressant tout ça

C'est super

Moi je m'extasie devant ce miracle de la vie...
Les miens en sont au même stade et cela commence à me faire peur, car finalement je m'aperçois qu'ils sont très nombreux !

Et toujours aucune contamination