Bonjour à tous !
Je me décide à faire un sujet sur mes tentatives de semis in vitro.
Ayant la chance d'avoir à disposition de belles installations au travail (laboratoire de CIV avec hotte à flux laminaire, autoclave, chambre de culture !), j'ai commencé à faire mes croisements en début d'année avec une capsule de Phalaenopsis hybride violet arrivée à therme en septembre.
J'ai récolté les graines dans un petit tube
Et je me suis lancée dans l'aventure du semis in vitro ce matin !
Avec comme milieux des variations trouvées par ci par là, un protocole utilisé pendant ma licence professionnelle et les conseils d'un ami qui fait régulièrement de la CIV sur vanille à la Réunion
Donc dispositif !
Milieux de culture :
- MS + vitamines MS + 30 g/L saccharose
- MS + vitamines Camborg + 30 g/L saccharose
- MS + vitamines MS + 20 g/L saccharose
- MS + vitamines Camborg + 20 g/L saccharose
- MS 1/2 + vitamines MS + 20 g/L saccharose
- MS 1/2 + vitamines Camborg + 20 g/L saccharose
- Knudson (en attente de réponse sur la composition du milieu commandé tout prêt).
Stérilisation :
1-> - Nettoyage des graines dans eau stérile + quelques gouttes de Tween (je n'avais pas de Triton : détergeant) 5 minutes minimum
- Surnageant vidé (les graines restent au fond)
- Hypochlorite de calcium à 1.25 % pendant 3 minutes
- Surnageant vidé
- 3 rinçages à l'eau stérile
2-> - Hypochlorite de calcium à 2.5 % pendant 3 minutes
- Surnageant vidé
- 3 rinçages à l'eau stérile
3-> - Hypochlorite de calcium à 3 % pendant 3 minutes
- Surnageant vidé
- 3 rinçages à l'eau stérile
Après la stérilisation, j'ai fait le semis (à la spatule) en tube dans lesquels le milieu a été solidifié en pente après passage à l'autoclave
Résultats, ce matin j'ai semé 74 tubes avec seulement la moitié de mes graines ! J'attends d'avoir un retour déjà sur les contaminations avant de me lancer dans le semis du reste de mes graines de cette gousse. Je les mets au noir pendant quelques jours et après hop sous les lumières de la chambre de culture de 32 m² ! Je vais pouvoir en faire des semis
J'ai reçu de la part de certains Orchidouxdingues d'autres graines de Phalaenopsis et bientôt Paphiopedilum, donc affaire à suivre !
) de mes graines semées vendredi qui ont bien gonflé 
