Orchidouxdingues

Bonjour à tous les cultivateurs in vitro.

Je vais pouvoir essayer la CIV grâce à ma professeur de S.V.T (très gentille ).
Je voudrais cloner des orchidées à partir de méristèmes.
Voici lesquelles et quels méristèmes :

Vanda 1 (hybride de V. coerulea) : apex racinaire

Vanda 2 (hybride de V. coerulea) : bourgeons de hampe en dormance et/ou apex caulinaire

Aliceara Thaitian Dancer : bourgeons de hampe en dormance et/ou apex caulinaire (peut-être apex racinaire)

Cattleya intermedia var. coerulea : apex racinaire

Phalaenopsis Baldan's Kaleidoscop : apex racinaire

Je me suis beaucoup documenté (vraiment beaucoup ).

J'ai trouvé un brevet qui parle de la multiplication des Phalaenopsis à partir d'un apex racinaire.
The root of a Phalaenopsis orchid thus prepared is cut at a length of from 1 to 5 mm, preferably from 2 to 4 mm, from its tip, using a sterile knife to give a root tip for culture.
-> la racine du Phal. doit être coupée entre 2 et 4 mm avec un couteau stérile.
The degree of PLB formation will be elevated effectively, if the top of the root tip for culture is notched to a depth of from 0.5 to 2.0 mm, preferably to a depth of about 1/2 of the length of said root tip, depending on the length thereof
-> il est préférable de couper la racine sur la moitié de sa longueur.

J'en ai tiré un protocole de manipulation.

Matériel

• Méristèmes
• Scalpel
• Pince à saisir
• Bouilloire
• Cocote-minute
• Eau de javel ou autre désinfectant
• Tubes à essai (ou autre contenant)
• Loupe Bino ( ?)
• Bec Bunsen
• Papier Joseph
• Milieux de culture (par ex. Murashige et Skoog)
• Phytohormones (Auxines et Cytokinines)
• Gants
• Un grand récipient avec de l’alcool
• Cinq petit récipients (eau stérile avec une goutte de liquide vaisselle ; eau de Javel diluée à 20 % (Trop ? Pas assez ?) ; trois avec de l’eau pure stérile)

Protocole
Toujours stériliser un instrument dans l’alcool, puis brûler l’alcool trois fois avant de s’en servir
Préparation :
1. Répartir les milieux liquides dans les contenants (les faire chauffer au bain-marie sans faire bouillir l’eau)
2. Stériliser les contenants fermés hermétiquement dans une cocote minutes pendant 30 minutes à partir du sifflement
3. Sortir les contenants et les laisser fermés
4. Laisser prendre la gélose (quelques heures)
5. Fermer les portes, fenêtres. Mettre un masque et des gants
6. Avec un chiffon imbibé d’eau de Javel diluée à 20 %, stériliser la paillasse
7. Imbiber le papier Joseph avec de l’eau de Javel diluée à 20 % et le disposer dans autour du bec Bunsen sur 15 cm (rayon). A droite, placer le matériel stérile ; derrière un bac avec de l’eau de Javel/alcool ; à gauche les tubes, porte tubes, méristèmes…

Stérilisation des méristèmes :
1. Rincer à l’eau pure. Tremper dans de l’eau stérile avec une goutte de liquide vaisselle pendant 5 minutes
2. Tremper 12 minutes dans l’eau de Javel à diluée à 20 % (dans la zone stérile)
3. Rincer dans de l’eau stérile 4 fois pendant 5 minutes
4. Inciser les racines sur la moitié dans leur longueur

Planter les méristèmes dans les milieux


Qu'en dites-vous ? Des choses à ajouter, enlever ?
Je pourrais travailler au lycée, donc bien plus adapté à des milieux stériles.

Je m'interroge aussi beaucoup sur les milieux de culture : Clivia m'a conseillé le Murashig et Skoog et en rajoutant de la gibbérelline à 0,1 mg/l et du sucre à 20 g/l.
Est-ce que vous en connaissez un meilleur, plus tourné vers la propagation de méristèmes ?

Voilà, c'est tout
Merci beaucoup

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L’expérience est une lanterne que l'on porte dans le dos et qui n'éclaire que le chemin parcouru.
^_ Confucius

Ne serait-ce pas un brevet de 'Sapporo Brewery Limided', ça ?
Si c'est le cas, il faut savoir qu'ils déposent des brevets sur à peu près tout (et n'importe quoi) ce qui traîne dans les publications scientifiques (ou pas) et qui n'a pas été déposé en temps et en heure !
Parfois c'est sérieux ; parfois c'est n'importe quoi...

Dans le cas de CIV d'orchidées par propagation de méristèmes racinaires, force est de constater que LES PRODUCTEURS PROFESSIONNELS n'utilisent pas cette méthode et préfèrent travailler sur bourgeons caulinaires (aisselles de feuilles, base de pseudobulbes...) ou bourgeons dormants de hampes florales.

Dans la liste de matériel, il me semble qu'il te manque une bonne loupe bino et de bons instruments de dissection, sauf su tu as des yeux bioniques !

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Cría cuervos y te sacarán los ojos… Le pingouin est DALTONIEN : les goûts peuvent toujours se discuter, mais pas les couleurs !

Ça semble être ça Philippe.
http://www.google.com/patents/US5864985

C'est avant d'être de la multiplication "pure", une expérience qui se voudrait scientifique et pédagogique.

J'ai bien mis la loop bino Scalpel et pince aussi
Qu'est-ce que tu préconises en plus ?

Merci

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Romain, j'avais étudié la culture de méristèmes il y a bien longtemps et j'avais vu à l'époque des sytèmes où le milieu de culture était conservé à l'état liquide, dans des tubes à essais, puis les tubes étaient fixés sur une grande roue inclinée à 45° par rapport à la verticale. La roue tournait lentement. Ainsi les méristèmes étant remués sans cesse, ne savaient plus où était le haut et le bas et se développaient dans tous les sens. Il suffisait de les redécouper en petits morceaux régulièrement et de reprendre la manipulation pour les multiplier de façon rapide. L'idée étant que dans une capsule tu as des milliers de plantes potentielles et que, avec les méristèmes tu n'as que quelques-uns au départ. Plus le fait que la plante obtenue est identique. Tu as entendu parler de ça ?
Si tu as un vélo tu peux tenter le coup de bricoler quelque chose, il te suffira de donner un coup de pédale de temps à autre.

Bah, pas grand chose...
Peut-être juste d'éviter l'épilation gratuite des avant-bras (voire plus) avec la flamme du bec bunsen !

Pour ma part, je vais bientôt avoir un peu de matos au labo pour m'amuser : hotte à flux laminaire, autoclave électrique automatique, agitateur vibrant, etc.

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Jean, je pense que ce sera un peu trop l'agitation dans tous les sens
Mais jamais entendu parler de ça

Philippe, je ferai attention
C'est bien cette arrivée de matos, faudra juste pas privatiser le labo

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Romain, il faudrait que je cherche dans mes vieux bouquins au grenier, il y avait des photos du bazar, grande roue de 1.50 m de diamètre avec des centaines du tubes.

On va se limiter à quelques (moins de dix)

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J'ai retrouvé le bouquin et la photo, pas toute jeune, extraite de "Cultivo de Orquideas no Brasil" de Waldemar Silva, édition 1972.... Ouvrage acheté là-bas quand j'y travaillais et que je me suis pris de passion pour les Cattleya...
On y voit la fameuse roue avec des centaines d'emplacements pour les tubes. Un éclairage fluorescent est placé au-dessus, je l'avais oublié.

Oui, il faut maintenir le milieu liquide en agitation permanente ; si on travaille sur gélose, je ne crois pas que ce soit nécessaire (d'après ma maigre docu).

Mais à toute fins utiles :

https://portail.associationspore.com/in ... magnetique

J'avais un lien pour bricoler un agitateur rotatif, mais je ne le trouve plus, grr...

Un microtome à bricoler soi-même :
http://micromonde.free.fr/bricolage/mic ... rotome.htm

Edité : pas retrouvé le lien initial, mais ceci devrait faire l'affaire, il suffit de mettre le support du dremel autrement pour que la roue tourne verticalement (125 RPM)
http://diybio.org/2012/06/11/dremelfuge-classic/
Quoi que je doute qu'il soit possible de faire tourner le dremel aussi lentement...

Merci à vous

Je reviens sur trois questions :
Désinfection : eau de javel diluée à 20 % (équivalent à 1 % d'hypochlorite de sodium) pendant 10 - 20 minutes c'est bien ?
Milieux : Murashige et Skoog, c'est bon ?
Le protocole est bon ?

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Pour les milieux ma "culture" s'est arrêtée à Knudson, je ne serai donc d'aucune utilité pour toi, autant semer sur les vieux substrats colonisés par le champignon presque, les temps préhistoriques de l'orchidophilie quoi...

Je vais éviter

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De toute façon, pour les milieux, on est fort limité ; certes on peut toujours modifier, mais il faut trouver tous les produits, et dans des conditionnements qui conviennent à des amateurs...

Je continue à chercher, pour voir si je trouve des infos plus pointues

Merci Angie

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http://www.allsciences.com/
Ceci dit, je n'ai rien encore commandé sur le site, mais on y trouve tout ce qu'on veut.

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https://sites.google.com/site/orchidees ... epiphytes/
http://mosacera.unblog.fr/qui-suis-je/

Intéressant ! Merci