Bonjour à tous les cultivateurs in vitro.
Je vais pouvoir essayer la CIV grâce à ma professeur de S.V.T (très gentille
).Je voudrais cloner des orchidées à partir de méristèmes.
Voici lesquelles et quels méristèmes :
- Vanda 1 (hybride de V. coerulea) : apex racinaire
- Vanda 2 (hybride de V. coerulea) : bourgeons de hampe en dormance et/ou apex caulinaire
- Aliceara Thaitian Dancer : bourgeons de hampe en dormance et/ou apex caulinaire (peut-être apex racinaire)
- Cattleya intermedia var. coerulea : apex racinaire
- Phalaenopsis Baldan's Kaleidoscop : apex racinaire
Je me suis beaucoup documenté (vraiment beaucoup
).J'ai trouvé un brevet qui parle de la multiplication des Phalaenopsis à partir d'un apex racinaire.
The root of a Phalaenopsis orchid thus prepared is cut at a length of from 1 to 5 mm, preferably from 2 to 4 mm, from its tip, using a sterile knife to give a root tip for culture.
-> la racine du Phal. doit être coupée entre 2 et 4 mm avec un couteau stérile.
The degree of PLB formation will be elevated effectively, if the top of the root tip for culture is notched to a depth of from 0.5 to 2.0 mm, preferably to a depth of about 1/2 of the length of said root tip, depending on the length thereof
-> il est préférable de couper la racine sur la moitié de sa longueur.
J'en ai tiré un protocole de manipulation.
Matériel
• Méristèmes
• Scalpel
• Pince à saisir
• Bouilloire
• Cocote-minute
• Eau de javel ou autre désinfectant
• Tubes à essai (ou autre contenant)
• Loupe Bino ( ?)
• Bec Bunsen
• Papier Joseph
• Milieux de culture (par ex. Murashige et Skoog)
• Phytohormones (Auxines et Cytokinines)
• Gants
• Un grand récipient avec de l’alcool
• Cinq petit récipients (eau stérile avec une goutte de liquide vaisselle ; eau de Javel diluée à 20 % (Trop ? Pas assez ?) ; trois avec de l’eau pure stérile)
Protocole
Toujours stériliser un instrument dans l’alcool, puis brûler l’alcool trois fois avant de s’en servir
Préparation :
1. Répartir les milieux liquides dans les contenants (les faire chauffer au bain-marie sans faire bouillir l’eau)
2. Stériliser les contenants fermés hermétiquement dans une cocote minutes pendant 30 minutes à partir du sifflement
3. Sortir les contenants et les laisser fermés
4. Laisser prendre la gélose (quelques heures)
5. Fermer les portes, fenêtres. Mettre un masque et des gants
6. Avec un chiffon imbibé d’eau de Javel diluée à 20 %, stériliser la paillasse
7. Imbiber le papier Joseph avec de l’eau de Javel diluée à 20 % et le disposer dans autour du bec Bunsen sur 15 cm (rayon). A droite, placer le matériel stérile ; derrière un bac avec de l’eau de Javel/alcool ; à gauche les tubes, porte tubes, méristèmes…
Stérilisation des méristèmes :
1. Rincer à l’eau pure. Tremper dans de l’eau stérile avec une goutte de liquide vaisselle pendant 5 minutes
2. Tremper 12 minutes dans l’eau de Javel à diluée à 20 % (dans la zone stérile)
3. Rincer dans de l’eau stérile 4 fois pendant 5 minutes
4. Inciser les racines sur la moitié dans leur longueur
Planter les méristèmes dans les milieux
Qu'en dites-vous ? Des choses à ajouter, enlever ?
Je pourrais travailler au lycée, donc bien plus adapté à des milieux stériles.
Je m'interroge aussi beaucoup sur les milieux de culture : Clivia m'a conseillé le Murashig et Skoog et en rajoutant de la gibbérelline à 0,1 mg/l et du sucre à 20 g/l.
Est-ce que vous en connaissez un meilleur, plus tourné vers la propagation de méristèmes ?
Voilà, c'est tout
Merci beaucoup
