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Semis et culture in vitro
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Auteur:  Gandalf [ Sam Mar 11, 2023 8:52 pm ]
Sujet du message:  Semis et culture in vitro

Hello les amis,

Dans une autre rubrique je vous faisais part de mon intension de m'essayer à la reproduction et à la culture in vitro.

Dans un 1er temps je vais me faire la main avec des graines d'Epidendrum nocturnum, Ghislaine va me donner 2 capsules (encore merci à toi ;) ). En parallèle, d'ici quelques jours, je vais tenté d'hybrider mon Phalaenopsis blanc avec mon mini Phalaenospis 'Velours Violet' (comme le nomme Cloodie ;) ) Et enfin, beaucoup plus tard, si j'arrive à maîtriser la technique, je m'attaquerais à l'hybridation de mes Paphiopedilum et Phragmipedium. Mais bon, on en est pas encore là :mrgreen:

Le matos :
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Il ne faut pas grand chose en fait. Il faut surtout de la méthode et de la rigueur. J'en profite pour dire un grand merci à Cubzac et à Gérard pour leurs précieux conseils et pour leur patience ;)

La première chose à faire est de préparer les flacons de culture, en l'occurrence des boîtes de pétri, pour le semis. Il faut le faire plusieurs jours à l'avance, ainsi, si la stérilisation n'a pas bien fonctionné, on voit assez rapidement s'il y a une contamination ou pas. Cela évite de semer dans un milieu de culture contaminé.

Bon... Bah ça a été un véritable fiasco... Les boîtes de pétri étaient en plastique et elles n'ont pas supporté la stérilisation. Quand j'ai ouvert la cocotte minute, je me suis retrouvé avec des trucs informes tout recroquevillés :hihihi:
Pas grave. Je sais maintenant que les boîtes de pétri en plastique ne sont pas adaptées. Je me suis donc commandé des boîtes de pétri en verre.

Je vous tiendrai au courant de la suite de cette "aventure" au fur et à mesure ;)

Auteur:  Ghislaine65 [ Sam Mar 11, 2023 10:03 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Mince, pas de chance pour les boîtes :(

J’espère ne pas te faire un cadeau empoisonné avec les capsules :oops:
Il me tarde de lire la suite.

Auteur:  ange [ Dim Mar 12, 2023 12:59 am ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Bon courage et on attend la suite de l'aventure :wai:

Auteur:  Cloodie [ Dim Mar 12, 2023 8:45 am ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Je déplace ton sujet dans "Hybridation et culture in vitro" ;)

Bonne chance, on va suivre tes péripéties! :mrgreen:

Auteur:  Coco-49 [ Dim Mar 12, 2023 9:55 am ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Bonjour,

Très intéressant. Moi aussi j'attends la suite avec impatience.

Coco

Auteur:  Gandalf [ Dim Mar 12, 2023 2:59 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Merci à tous de l'intérêt que vous portez à cette expérience. J'me sens moins seul :mrgreen:

Ghislaine65 a écrit:
Mince, pas de chance pour les boîtes :(

J’espère ne pas te faire un cadeau empoisonné avec les capsules :oops:
Il me tarde de lire la suite.

Pourquoi serait-ce un cadeau empoisonné ? ;)
Actuellement je n'ai pas de capsule ni de graines disponibles. C'est au contraire une excellente opportunité pour commencer. Si je réussis la fécondation de mes Phalaenopsis, je devrais attendre 7/8 mois avant de récolter les capsules. Autant profiter de ce laps de temps pour expérimenter ;)

Auteur:  Herve 34 LUNEL [ Dim Mar 12, 2023 7:55 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Bon courage.

Auteur:  Gandalf [ Lun Mar 13, 2023 6:04 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Merci ;)

C'est le genre de truc qui me plaît. Aller jusqu'au bout des choses... Un peu comme toi avec l'aquariophilie ;)

Auteur:  lulu974 [ Mer Mar 15, 2023 1:31 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

J'attends la suite avec impatience :yipi:

Auteur:  Gandalf [ Jeu Mar 16, 2023 8:57 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Petite avancée :

J'ai reçu hier mes boîtes de pétri en verre et j'ai donc préparé mes milieux de culture. Sur 5 boîtes, 4 ont pris. S'il n'y a pas eu de contaminations, je prévois le semis pour le W.E. du 25/26 mars.
A priori ce devrait être aussi ce même week-end que je réaliserais l'hybridation de mes 2 Phalaenopsis :-)

Auteur:  Ghislaine65 [ Jeu Mar 16, 2023 9:10 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Si ça te convient toujours, je poste les capsules lundi.

Auteur:  Gandalf [ Ven Mar 17, 2023 9:37 am ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Oui on fait comme ça Ghislaine ;) Ce laps de temps va me permettre de m'assurer que mon milieu de culture n'est pas contaminé. Si je reçois les capsules vendredi/samedi prochain ce sera parfait ;)

Merci :-)

Auteur:  Gandalf [ Sam Mar 25, 2023 3:06 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Voilà... J'ai réalisé le semis... :P

Voici les capsules. Encore merci Ghislaine. Je ne sais pas si tu a reçu mon dernier MP (mercredi dernier). J'ai l'impression que ma messagerie dysfonctionne :grat:
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Inspection de mes milieux de culture. L'un est clairement contaminé et un autre est suspect. D'où l'intérêt de les préparer une bonne dizaine de jours avant le semis.
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Prélèvement des graines. Elles sont vraiment minuscules.
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Après stérilisation des graines et rinçage, dépose des graines sur le milieu de culture. Ce n'est vraiment pas évident car les graines sont toutes agglomérées et il n'est vraiment pas facile de les étaler. Là j'ai un doute mais bon. On verra bien...
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Mise en culture dans une mini serre chauffée.
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Maintenant il n'y a plus qu'à patienter.
Si le milieu a été contaminé lors du semis, je le saurais assez rapidement. D'ici une dizaine de jours.
S'il n'a pas été contaminé, il faudra patienter plusieurs semaines/mois avant de voir si des protocormes se développent...

Suite au prochain épisode ;)

Auteur:  Ghislaine65 [ Sam Mar 25, 2023 9:46 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

J’espère que ça va fonctionner Gandalf, que tu sois récompensé pour le travail fourni.
J’ai seulement vu ton message aujourd’hui :oops:

Je surveillais ma boîte mail en attendant un mail du forum m’indiquant que j’avais reçu un message privé, mais je n’ai rien reçu. Comme je consulte le forum depuis mon téléphone, je n’ai même pas vu que j’avais un message jusqu’à ce matin :ouin:

Auteur:  Gandalf [ Dim Mar 26, 2023 12:01 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Pas grave Ghislaine... ;)

Auteur:  Gandalf [ Dim Avr 02, 2023 12:51 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Bon eh bien comme il fallait s'y attendre, mes 2 boîtes ont été contaminées. C'est donc un échec. Mais c'est pas grave. Je dois améliorer ma technique.

Pour commencer je n'avais pas compris que lorsque l'on a des capsules vertes, il est inutile de stériliser les graines. Il faut simplement stériliser la capsule entière avant de prélever les graines.

La lampe à alcool que j'ai ne produit pas une flamme suffisamment grande et chaude. Du coup je n'ai pas une zone stérile suffisante. J'ai donc commandé une nouvelle lampe.

Enfin, pour la prochaine fois (j'ai encore une capsule), je vais essayer 2 méthodes : 1 en boîtes de pétri mais scellée avec du cellophane et 1 dans des petits pots pour bébé avec des couvercles transparents.

Suite au prochain épisode donc... ;)

Auteur:  Ghislaine65 [ Dim Avr 02, 2023 2:07 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Mince :???:
C’est en forgeant qu’on devient forgeron :-) Ça ira mieux la prochaine fois.

Auteur:  lulu974 [ Dim Avr 02, 2023 2:46 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

La boîte de Pétri entourée d'une bande de cellophane, c'est ce qui se fait dans mon labo. Ils font ça pour leurs semis de vanille. Ils essaient d'améliorer la teneur en vanilline des lianes de vanilles en effectuant des croisements divers et variés.

J'avoue que je les admire beaucoup car j'ai tenté une fois de semer sous hotte et j'ai tout contaminé. Je suis trop bavard. Pense à mettre un masque aussi car les postillons de salives si tu parles ou éternue peuvent contaminer tes milieux.

Auteur:  Debra [ Dim Avr 02, 2023 6:22 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

J'admire ta patience et ta persévérance...

Après, je suis ambivalente envers la "stérilisation" depuis que ma maman s'est pourri la vie quand j'étais nourrisson en tenant à stériliser les biberons, et ça date tout ça, ça date. Ce n'est pas ce qu'elle a réussi le mieux dans sa maternité, tout de même. Ni pour son plaisir, ni pour le mien, d'ailleurs.
Mais, on verra avec tes plants. C'est en forgeant qu'on devient forgeron, certes.

Auteur:  Gandalf [ Dim Avr 02, 2023 6:41 pm ]
Sujet du message:  Re: Semis et culture in vitro

Pour la culture in vitro la stérilisation est tout simplement indispensable. Sinon tu cultives des moisissures et/ou des bactéries qui détruisent tes semis... ;)

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