Orchidouxdingues

Ce matin j'ai reçu mon colis et je viens de faire mon premier transpiquage... Encore une étape de franchie !

Premières impressions sur la glove-box : ça va super bien ! Confortable et accès facile !
Quelques soucis avec le papier essuie-tout qui se délite avec l'eau de javel... Soit j'ai trop aspergé, ou alors je vais essayer une autre marque...

J'ai fait 3 flacons avec la flasque, ils sont maintenant dans le terrarium... Plus qu'à attendre et bien sûr surveiller...

Si j'ai bien travaillé et que je n'ai pas de contamination, je passerai aux semis

Super ! Tu as repiqué quoi ?

Toutes mes félicitations

Plus qu'à attendre !

Merci de vos encouragements !

J'ai repiqué Epidendrum nocturnum (flacon de chez Phytorchid).

Ce matin tout avait l'air OK, je surveille de près avant de passer aux semis
J'ai bien désinfecté tout le matériel, et en plus j'ai travaillé en glove-box mais avec flacons, pour vraiment ne pas prendre de risque !

J'ai d'ailleurs des questions, je ferai un fil séparé.
Bonne journée à tous

Le semis est plus facile que le repiquage. Avec une seringue, un réchaud et sans glove box, tu verras.

Je trouve que le mieux, c'est quand même la hotte à flux laminaire... D'ailleurs je vais en chercher une demain... trop content

Bravo Orchidsworld bel équipement ! (pas dans mes moyens hélas !).

Merci Cubzak, mais je vais continuer dans la glovebox... Je suis un vrai danger avec la gazinière, alors avec un bec bunsen, ou même une lampe à alcool...

Les champions de la CIV, vous voulez bien aller voir mon post avec des questions, parce que je stresse avec cette histoire d'eau de javel létale (j'ai des plantules qui ont été en contact avec le sol de ma glovebox, inondé de javel) (merci déjà).

Jour 3 et pas de trace de contamination ni de plantule mourante !
Patience, patience !

Aïe ! Je crois que j'ai une catastrophe !

Jour 5 : pas de contamination, milieu nickel
Température constante 20 degrés (serre chauffante)
Lampe horticole 15 W allumée de 10 h à 1 h du matin.

Mes plantules sorties en sphaigne pure et celles passées en substrat normal (écorces fines + sphaigne) poussent bien.

Mais !

Mes plantules repiquées brunissent !
Celles qui sont tombées sur le sol de la glovebox (lit de javel), je comprendrais, mais aussi celles qui sont passées directement de la flasque-mère au flacon de repiquage brunissent aussi !

Quelqu'un peu me dire où est mon erreur ?
Mille mercis

En fait, et je connais bien le problème : le moindre contact de la plantule avec la solution de javel est fatal, il suffit que ta pince effleure le fond de ta glovebox et voilà, lorsque tu vas saisir ta plantule les tissus vont être attaqués par ce simple contact ! Et le mal se propage et gagne toutes les plantules qui virent au marron ! Les cellules végétales semblent cuire ou fondre !

Alors quesse qui fofer
Il faut changer sa méthode de travail ! Envoie moi un chèque en blanc signé Et je t'indiquerai une méthode qui va te rendre le sourire !

Merci Donc c'est fichu, pfff... Si je lave à l'eau stérile ce qui est resté vert, ça reste sans espoir ?

Je suis preneuse de ta méthode

Faut pas être si pessimiste, je sais pas j'ai jamais fait !

Tu peux trouver la solution toute seule, je vais t'aider !

Le problème : travailler dans un environnement stérilisé à l'eau de javel en solution, sans souiller ses outils stérilisés à l'autoclave !

1/ Evite d'avoir des traces liquides dans ta boîte

a : préparer la glovebox 20 minutes avant manip

b : essuyer avec un sopalin les résidus de solution, désinfecter y compris les flacons, les disposer dans la boîte

c : désinfecter tes pinces et spatule disposées dans un pot en verre (qui va rester un support neutre pour tes instruments) avec un autoclave, intoduire cet ensemble juste après stérilisation dans ta box

d : entre chaque manipulation, dépose tes outils dans leur support neutre

Voili voilà, tu peux trouver d'autres solutions ! Bien sûr

Une idée à explorer :

Tu prend des petites feuilles papier kraft, de taille toutes identiques. Tu en fais un petit tas (une vingtaine de feuilles) que tu enveloppes dans un papier d'alu (voire 2 l'un sur l'autre). Tu passes ça à la cocotte minutes pour stériliser. Éventuellement, une vingtaine de minutes, ensuite à four chaud pour éliminer toute trace d'humidité.
Tu obtiens un paquet de feuilles stériles, que tu peux introduire dans ta glove box avant désinfection.
Ensuite, une fois que tu as désinfecté ta glove box, tu peux ouvrir ton paquet de feuilles et tadam ! Tu as une surface stérile et sèche
Moi je fais comme ça sous hotte, mais je pense que tu peux facilement faire ça également en glove box.

Pour les plantules qui ont marroni (comment ça, c'est pas un vrai mot ?), ces plantules étaient à quel stade ? Bien développé ou plutôt protocorme ? Si c'est des protocormes peut différenciés, tu as un espoir que ça reparte. Ça me l'a fait sur des semis, j'ai récupéré peu de plantules au final, mais c'est toujours ça.

Sinon, pour la question du pourquoi les plantules ont marroni Eh ben je ne sais pas ! J'ai eu ce problème aussi quand je repiquais en glove box. Est-ce que ta javel n'est pas trop concentrée et rien que les vapeurs de javel tuent les plantules ?

Petite question... Pourquoi tu le fais sous la hotte ? Je ne vois pas l'utilité d'avoir ces feuilles stériles avec une hotte...

Ah oui et j'ai oublié, au sujet des feuilles de kraft, l'intérêt d'en avoir un petit tas, c'est de pouvoir changer de papier entre chaque manip, et donc d'avoir une surface stérile sans risque de contamination due à la manip précédente.

Si tu travailles proprement sous hotte, tu ne devrais pas avoir de contamination à chaque nouvelle manip, non ?

Un grand merci à tous pour vos conseils

J'ai stérilisé de l'eau distillée ainsi que mes instruments et du papier et un bocal pour avoir des surfaces sèches et stériles ; je vais tenter un déflaconnage suivi d'un lavage à l'eau stérile, puis repiquer ce qui n'est pas encore trop jaune/brun, pour voir !

Mes plantules ont 2/3 feuilles et mesurent environ 1 cm ; certaines ont un début de racine !

Je refuse de baisser les bras ! J'y arriverai !

Edité : j'ai passé le reste de la soirée et une partie de la nuit ; j'ai tout déflaconné en milieu stérile, et j'ai fait prendre un bain aux plantules, en veillant à enlever le maximum de milieu, puis j'ai repiqué en flacons neufs ce qui avait encore des parties vertes ; certaines plnatules ont fait de la racine malgré tout !

Protocole :
1 x 5 min dans un pot d'eau distillée stérilisée en agitant doucement pour dissoudre le milieu, pot couvert avec papier,

plantules prélevées 1 à 1, vérifier qu'il ne reste pas de milieu collé à la base,

1 x 5 min dans un autre pot d'eau stérilisée, pot couvert avec papier,

plantules prélevées si feuilles pas trop atteintes, vérification de leur propreté (plus de trace de milieu, pas de feuille pourrie),

stockage dans un troisième pot d'eau distillée couvert avec papier, le temps d'ouvrir un flacon,

pinces stérilisées posées dans un grand bocal d'eau stérile (ma pince est grande, ma glovebox assez petite, avec tout ce qu'il y avait dedans, c'était trop pour poser dans le plat en verre),

repiquage en rinçant la pince à chaque fois.

Matériel utilisé :
5 pots d'eau stérile (1 pour chaque bain, 1 pour stocker la pince, 1 pour la rincer entre chaque repiquage).

Ce matin, je ne constate pas d'aggravation... J'ai récupéré la moitié des plantules...
je vous tiens au courant !

Avec tout le mal que tu te donnes, ce serait pas juste si tu n'obtenais pas de résultat !
Alors on croise les doigts et on te soutient

Merci, ça me touche beaucoup