Orchidouxdingues

Bonjour,

J'ai actuellement en cours :

pollinisation de
- "cambria" cam 1 x cam 2

- phal 3 self
- phal 6 self
- phal 7 x phal 6
- phal 8 x phal 9
- phal 9 self
- pahl 9 x pahl 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8

Vous pouvez voir les photos dans ma galerie ou sur mon post "mes quelques fleurs".

Certaines fleurs présentent des modifications qui me laissent penser que...
Patience !

J'aimerais bien être capable de mener à bien un semis ; je sais que ce ne sont "que" de "bêtes" hybrides de phal sauvés pour la plupart, mais il faut bien commencer

J'ai déjà rassemblé de la documentation sur le semis stérile, au dessus de la casserole (vapeur), près d'une flamme, les schémas de glove-box ainsi que ceux de hotte (j'ai un mari bricoleur qui m'encourage à me dépasser)

Je voudrais avoir votre avis, si vous avez employé plusieurs de ces méthodes, pour me décider.

Selon moi (qui n'ai aucune formation scientifique, qui suis maladroite et distraite), les inconvénients des différents systèmes me sautent aux yeux :

- méthode vapeur : impossible quand on a besoin de lunettes, obligation de travailler sur un espace vraiment restreint, obligation de travailler avec des flacons à petite ouverture
- méthode flamme : dangereux quand on est maladroit, espace de travail restreint et non formellement délimité (visuellement), obligation de travailler avec des flacons à petite ouverture
- méthode glove-box : entrave ; en cas d'oubli d'un outil on ne sait pas l'introduire dans l'espace de travail, gants
- méthode hotte : coût

Au niveau de la désinfection et stérilisation :
Je connais les vertus de l'alcool et de l'eau de javel, ainsi que de la stérilisation en cocote-minute ; je souhaiterais en savoir plus sur la stérilisation au four (je dispose d'un four ménager au gaz capable de monter à plus de 250 degrés) : quelle température ne pas dépasser pour ne pas abimer le medium ? Faut-il utiliser un bain-marie ? Ou simplement placer un récipient d'eau sur la sole du four ?
J'apprends aussi qu'on peut stériliser au micro-ondes, ce qui serait pour moi la solution la plus facile, mais ce mode-là n'est détaillé nulle part : bain-marie ou pas, risque de dénaturer le médium...

Je suis donc preneuse d'information sur la stérilisation micro-ondes, pour plusieurs raisons :
- je peux mettre un micro-ondes dans la chambre à orchidées, ce n'est pas dangereux ! Ni bruyant, je peux travailler la nuit en cas d'insomnies !
- je peux utiliser des barquettes en plastiques comme celles qui sont vendues pour le commerce des denrées alimentaires : pas cher, 5 cm de profondeur, large, couvercle bien étanche, empilables facilement
- la consommation en énergie est moindre
- et en cas de petite faim en cours de travail ... plus besoin de redescendre en cuisine

Merci à tous ceux qui voudront bien m'aider à y voir plus clair en partageant leur expérience, en me conseillant ou en me donnant des pistes (j'ai épuisé Google scholar en français et en anglais)

Bonne soirée

angie

Bonjour Angie,

La culture in vitro est un vaste sujet dont chacun se fait plus ou moins une religion en fonction de ses possibilités financières et de place pour l'installation. c'est donc assez difficile de répondre par le biais d'un post.
Je pense qu'en faisant une recherche sur ce forum en tapant "in vitro", tu devrais trouver non seulement pas mal d'informations, mais aussi pouvoir bénéficier de l'avis de forumiens dont certains se sont lancés dans l'aventure depuis pas mal de temps.
Je n'ai qu'une maigre expérience ayant commencé au printemps de l'an dernier. Personnellement, je stérilise le milieu en cocotte minute à raison d'une douzaine de pots à la fois et il m'arrive de les conserver pendant des semaines avant de semer, ce qui permet, par ailleurs, de voir s'il n'y a pas de moisissure.
J'ai fais une glove box pour faire les semis. Soit, je sème "vert", ce qui est plus simple pour moi que la désinfection des graines, soit je désinfecte avec la méthode de vapeur de javel. J'ai essayé avec l'hypochlorite de calcium mais j'ai été déçu, ou les pots étaient infectés (concentration trop faible probablement) ou pas de germination(concentration trop forte ?). J'ai encore des pots de ce type qui ont 10 mois avec des graines de papilionanthe. J'attends au cas où...
Pour le repiquage, dans la glove box, c'est sans souci pour le passage d'un pot stérile à un autre. J'ai aussi croisé quelques Phalaenopsis sans nom pour le fun et, même si le résultat est souvent stérile, les gousses arrivées à terme ont germé et ce sont même les graines qui ont verdi le plus rapidement.
Je n'ai aucune expérience dans le domaine du micro-onde, par contre.

Voilà, si tu as d'autres questions précises, je peux te répondre pas MP, si tu veux.

Bon amusement dans ton aventure.

Amicalement

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Alain

Coucou !

Pour ma part, et comme Alain, ça fait peu de temps que je me suis lancée (janvier 2013). Là-dessus, une grossesse, des travaux dans la chambre de bébé, tout ça en travaillant, bref, les conditions n'étaient pas idéales.
Mes semis ont été assez "faciles" : travail à la flamme, car pour les semis, c'est facile de travailler dans un espace restreint.
C'est après que ça s'est corsé, au niveau des repiquages, j'étais incapable d'utiliser la glove box, c'est pas pratique, j'oubliais toujours quelque chose, je n'arrivais pas à dévisser mes bocaux, c'était galère. En plus, on ne peut pas mettre beaucoup de bocaux dans la glove box à la fois, donc à chaque fois que les bocaux sont pleins, il faut refaire tout le protocole de désinfection pour remettre des bocaux vides dans la glovebox.
Du coup, je me suis équipée d'une hotte.
Je l'ai achetée d'occase sur leboncoin (merci encore pour le tuyau, fred, si tu passes par là !)
Je ne l'ai pas payée cher (100 euros), mais j'en ai eu pour très cher de transport (180 euros) et j'ai changé le filtre (je crois 350 euros).
Plus quelques matériaux de bricolage pour lui faire une porte, car comme elle ne tourne pas en continu, j'ai fait une porte afin que le filtre ne se contamine pas.

Entre temps, j'avais perdu une bonne partie de mes semis, soit à cause des contaminations lors de mes essais de repiquages raté, soit par maque de repiquage à temps.

J'ai tout de même réussi à sauver quelques semis et maintenant avec la hotte, ça roule.

Voilà pour mon expérience perso, je m'éclate avec les semis, les repiquages ; voir les plantules grandir, c'est génial ! J'ai acclimaté quelques orchidées que j'avais semées, c'est une grande fierté pour moi. Mais il y a un sacré budget derrière !

Bonjour,

Pour ma part je vais bientôt me lancer... La glove box est prête, j'attends encore un peu pour couler mes milieux car mes capsules ne semblent pas encore prêtes (déjà 6 mois de gestation !).


Par contre Alain , peux-tu m'en dire plus sur la méthode de désinfection à la vapeur de javel ?

Bonjour Alain, Ion-ion et Cicerf

Merci pour vos réponses
J'ai déjà bien "épluché" le forum, ainsi que d'autres, visité beaucoup de liens, et suis fort consciente de l'aventure

Les protocoles de désinfection ne me font pas peur car il suffit d'être bien rigoureux, de calculer convenablement et d'avoir une bonne minuterie ; de même les coulages de mileu ne devraient pas me poser de souci.

La stérilisation du milieu coulé est plus problématique car je voudrais pouvoir travailler avec des récipients en plastique (moins cher !) : en aucun cas ils ne résistent à la cocotte ! Je continue donc mes recherches sur la stérilisation aux micro-ondes. Peut-être qu'il me faudra passer par boîtes de Pétri (stériles, normalement ?) + medium stérilisé à la cocotte puis coulé dans les boîtes dans la glovebox, mais ce protocole est-il faisable? Introduire le flacon chaud sortant de la cocotte dans la glovebox, stériliser le tout (javel), le medium serait-il encore "coulable" ?

Je garde la piste hotte d'occasion et je continue mes recherches "micro-ondes"

Merci pour vos points de vue et partages d'expérience
Amitiés
angie

Oui pas de souci, c'est faisable, tu peux laisser un peu ton flacon de milieu refroidir avant de le couler pour ne pas te brûler, tu as un peu de marge.
Pour les contenants, certains contenants plastique passent à la cocotte. Il faut rechercher les contenants en polypropylène, ils sont identifiables car il y a un petit triangle avec un 5 dedans.
Moi j'utilise ça ou bien des pots en verre avec couvercle (conserves, confitures, petits pots de bébé). Tu peux en récupérer aussi auprès de tes proches.
Et en septembre, une source quasiment inépuisable va me fournir des petits pots de bébé vides : la crèche! Si il y en a une près de chez toi, tu peux peut être demander à récupérer les petits pots vides.

Dans google image, tu tape "polypropylène 5" et tu verras tout de suite ce que je veux dire dans mon message précédent.

Bonsoir

Merci pour le tuyau PP5 Et bonne piste la crèche, je vais me renseigner

j'ai un peu écumé le net pour trouver sur la stérilisation au four micro-ondes ; on vend des stérilisateurs à biberon qui vont au micro-ondes et on compte environ 6 à 10 minutes selon la puissance du four ; cependant, il semble qu'il s'agisse plus d'un gadget pour rassurer les parents ; les organismes de contrôle alimentaire ne considèrent pas cette procédure comme une "vraie" stérilisation.

De plus, s'il est assez facile de rendre stérile de la verrerie, cela se complique lorsque ces contenants comprennent un mileu nutritif avec un Ph supérieur à 4.5 : il faut que la température soit à coeur, et constante pendant un certain nombre de minutes, selon la température acquise.

Je continue mes recherches et j'essaierai de vous faire un dossier complet.

Quand il me reste quelques flacons qui n'ont pas pu rentrer dans la cocotte, s'il en reste peu, plutôt que de m'embêter à refaire une cocotte, je passe les quelques flacons restant au micro-ondes.
Je les mets heuuuuuuu ... à peu près 2 minutes pour 4 ou 5 petits pots. J'ajuste le temps en fonction de la quantité, je vérifie que le milieu fasse encore un peu de bulles quand j'ouvre la porte. Je n'ai pas un protocole très très établi ! Mais je n'ai jamais remarqué plus de contaminations qu'avec la stérilisation à la cocotte.
Si tu veux être sûre de toi, tu peux peut-être faire des essais avec de l'eau sucrée ?

Personnellement, j'utilise des petits pots en "plastique" transparents achetés sur le site de Patrick Polbos et ça marche du tonnerre.

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Alain

Bonjour Alain

Merci du tuyau Je note

Bonjour,

Pense aussi à acheter des membranes.

fred

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« Quand vous plantez une graine une fois, vous obtenez une seule et unique récolte. Quand vous instruisez les gens, vous en obtenez cent. »

Confucius

D'accord, merci Je note tout sur une liste car pour le moment, je dois budgétiser J'espère beaucoup du Père Noël

Ben va falloir être très sage alors !

Coco

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Mourir debout plutôt que vivre à genoux !

Promis

Bonjour Cicerf,

J'ai découvert ce type de désinfection sur un site anglophone. J'ai un article Pdf en anglais qui explique en détail mais je ne sais pas comment mettre un document comme cela sur un post. Sur le site anglophone, le forumien a mis des photos.
En résumé, je prends une pochette plastique ouverte sur 2 côtés et, avec des ciseaux, je fais un trou sur une des faces (grandeur suivant la dimension du pot, je dirais +/- une pièce d'un euro) et je glisse un morceau d'ouate entre les faces de plastique. Quand j'ai semé, je vaporise l'eau de javel à 5 % sur le coton qui se trouve devant le trou et je place la pochette sur le pot, coton vers le bas bien sûr. Je referme le pot et je mets en attente pendant 4 h environ. Ensuite, je retire délicatement le coton (ou même la pochette si c'est possible en soulevant légèrement le couvercle). Je referme bien le pot et je met un cellophane autour. Cela fonctionne à l'air libre mais c'est encore plus efficace en glove box bien sûr. J'ai environ 80 % de réussite sans infection et avec germination. Cela a bien fonctionné avec des Laelia et croisement de Phalaenopsis hybrides et croisement avec Ascocenda. C'est plus délicat pour les graines de Disa, je pense, peut-être plus délicates. A voir à la longue... Enfin, tout ceci n'est que ma maigre expérience. Elle vaut ce qu'elle vaut. Pour ma part, j'ai des difficultés à stériliser avec l'hypochlorite de calcium, aussi bien dans la concentration que dans la récupération des graines.

Amicalement

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Alain

Ca a l'air pratique ta méthode de désinfection, j'ai quelques questions :

Tu vaporises ton coton face "extérieure" du pot du coup ? Et tu le vaporises beaucoup ? Le coton doit être imbibé de javel ?
Tu utilises de la javel en berlingot ? Tu la dilues ?
la pochette ouverte sur 2 côtés, c'est quoi son utilité ? Pourquoi un simple morceau de plastique ou de cellophane ne convient pas ?
Tu utilises quelle taille de pot pour tes semis ? Car j'imagine qu'il faut adapter la quantité de javel à la quantité d'air à stériliser ?

Bon allez, j'arrête pour l'instant

L'eau de javel en grande surface étant à 3,6 % dans ma région, je suis allé dans une droguerie où j'ai acheté de l'eau de javel à 13 % que je dilue avec de l'eau distillée. Je la verse dans un vaporisateur opaque et j'imbibe l'ouate au niveau du trou, puis je retourne la pochette sur le pot et je replace le couvercle. La concentration reste la même quelle que soit la dimension des pots. Je prends des petites pochettes pour la surgélation et je coupe la glissière et un côté ; c'est pourquoi il y a 2 ouvertures. Je trouve, ainsi, que c'est plus simple pour retirer le coton avant la fermeture avec une petite pince, à moins de retirer la pochette complète. Avec le cellophane, cela ne doit pas être facile. J'essaie de limiter les manipulations et ouvertures au maximum puisque le pot a été stérilisé. Les pots sont de diamètre 11 cm sur 3 cm de haut (ou 5 cm de haut pour les repiquages) ou aussi de 5 cm de diamètre sur 3 cm de haut pour les plus petits.

Bonne journée

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Alain

Bonjour Alain
Merci pour toutes tes infos
Veux-tu STP donner le lien du site anglophone ? Je tâcherai de récupérer le pdf

Encore une question : tu dilues comment l'eau de javel à 13 % ?