Orchidouxdingues

Bon je me permet de demander ici plutot que de faire un topic, on a besoin de quoi pour faire de la gélose ?
J'aimerais m'y mettre mais avant, il faut le milieu et si possible un petit descriptif des mannip pour pas me tromper

Merci

Tu peux commander ton milieu de culture sur le site de Damas : phytorchid

Pour le semis d'épiphytes exotiques : P668 à la dose normale
Pour le clonage de hampe de phalaenopsis : P793
Ajouter de l'agar au P668 ou P793 si tu souhaites obtenir un milieu de culture solide. Certaines personnes sèment en milieu liquide (il faut alors secouer le milieu et les graines de temps en temps).

Les milieux sont vendus sous forme de poudre conditionnée dans un sachet. La dose contenue dans un sachet permet de préparer 1 litre de milieu (en diluant la poudre dans 1 litre d'eau distillée ou osmosée). La dilution de la poudre (avec l'ajout éventuel de l'agar) dans l'eau se fait de préférence à chaud.
Lorsque la poudre est bien diluée dans l'eau, verser un peu du liquide ainsi obtenu au fond de chaque flacon. Reboucher les flacons sans visser le bouchon à fond (pour permettre à l'air de s'échapper et éviter tout éclatement de flacon lors de la stérilisation dans l'autocuiseur). Puis placer les flacons dans le panier d'un autocuiseur (ne pas oublier de mettre de l'eau au fond de la cocotte !), mettre en place le couvercle de l'autocuiseur et "faire cuire" les flacons pendant 20 minutes (compter ces 20 minutes à partir du moment où l'autocuiseur se met à siffler). A l'issue des 20 minutes, arrêter la cuisson et laisser l'autocuiseur refroidir (cela peut durer plusieurs heures), puis l'ouvrir et rapidement visser à fond les bouchons des flacons.
Attendre une semaine ou deux avant de semer ou cloner afin de détecter d'éventuelles contaminations (si stérilisation des flacons mal faite).

Petit truc : pour réduire le risque de contaminations à long terme, après stérilisation, après semis et après repiquage, étirer du film alimentaire autour du bouchon et du haut de chaque flacon afin de constituer un barrage contre le passage des micro-organismes sous le bouchon. Moi je pulvérise même de l'alcool 90° sur le haut des flacons avant de les filmer.

Tres interesant comme système. Ça a l'air plus sur et plus facile que le système "à la flamme".

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Jean-Bruno

And in the end, the love you take is equal to the love you make.

Voici quelques photos de mes expériences de clonage.




Après un certain temps passé dans le P793, les plantules se mettent à perdre leurs feuilles (voir photos ci-dessous). De nouvelles feuilles poussent mais meurent rapidement.
Pour améliorer le développement des plantules, je les ai transférées dans du P668 le 7 janvier 2012. Dans 1 mois ou 2, je mettrai de nouvelles photos pour montrer leur état. J'espère qu'elles auront à nouveau un beau feuillage.

A quoi est dus cette perte de feuilles ?

Bonne question Ulysse !
J'ai déjà observé le même phénomène chez Damas sur des plantules issues de clonage sur du P793.

On incorpore souvent du charbon de bois dans les milieux de multiplication in vitro. Il me semble que son rôle est d'absorber des toxines libérées par les plantules elles-mêmes et d'empêcher l'auto-empoisonnement de celles-ci (un spécialiste de la CIV pourra me corriger s'il le désire). Le P793 est un milieu de clonage sans charbon de bois. On peut donc penser que la perte des feuilles est le signe d'un dépérissement de la plantule suite à un auto-empoisonnement.
Autre hypothèse : les plantules manquent d'éléments nutritifs, le P793 étant un support de clonage et non un support de croissance.

Quoi qu'il en soit, le P668 étant un milieu de croissance (donc nutritif) chargé de charbon de bois, je pense que la transplantation de mes plantules dans ce milieu ne pourra que leur faire du bien.
De plus, le fabricant des P668 et P793 préconise ce changement de milieu sans préciser le moment où il faut le faire. Dans mon cas, je crois qu'il était grand temps de le faire !

Bonjour à premiere vue , il me semble que c'est un dendro, qui est cloné, j'en ai plusieurs especes en culture et certains dendros meme en culture in vitro , suivent leur cycle naturel, , il se mettent au repos a partir de novembre perdent leurs feuilles qui jaunissent dans un premier temps .
je l'ai remarqué sur dendro parishii , c'est tres net

Le milieu de clonage, c'est considéré comme clonage parceque c'est bourré d'hormones ?

C'est que je compte bien m'y mettre, c'est surtout le protocole du clonage qui me freine ...

Merci Cubzak, mais ce n'est pas du dendro. C'est du phal. La chute des feuilles n'est donc pas liée au cycle végétatif des plantules.

En effet Ulysse, le P793 contient des hormones.
Pour le clonage, je pense qu'il faut commencer par les phal. A partir des hampes florales, ce n'est pas trop difficile. Mais ça ne marche pas à tous les coups. Je fais une tentative en ce moment sur Phalaenopsis Purple Gem blue. Beaucoup de noeuds partent hélas en ramification de hampe. Le reste est plutôt informe, sans développement de feuilles ...
Le protocole de clonage n'est pas très complexe. Il faut fragmenter une hampe en laissant de la tige en-dessous et au-dessus de chaque noeud. Pour stériliser les fragments, un bain de quelques minutes dans de l'alcool ménager, puis un bain dans de l'hypochlorite de calcium (en solution sursaturée avec un peu de liquide vaisselle) pendant quelques minutes, puis on enlève les bractées qui recouvrent les bourgeons, puis enfin un dernier bain dans une solution sursaturée d'hypochlorite de calcium (avec un peu de liquide vaisselle) pendant 20 à 30 minutes, voire un peu plus. Les extrémités des fragments vont blanchir. Il ne faut pas s'en inquiéter. Le rinçage dans de l'eau stérile n'est pas nécessaire. Le dernier bain doit être effectué dans un environnement stérile pour ne pas contaminer les fragments à la sortie du bain. Ensuite on plante et on attend que ça pousse .

Ok mais le passage le plus difficile doit etre le passage de P793 en p668 non ?

L'age de l'explant a t-il une influence sur la formation d'un keykis et non d'une ramification ?

Et on en trouve ou généralement de l'hypochlorite de calcium ?

Le passage de P793 en P668 consiste à dépiquer la plantule du P793 et à la repiquer dans du P668.
Il n'y a pas d'étape de stérilisation des plantules. Il faut seulement veiller à travailler en environnement stérile.
Je trouve que c'est plus simple que tout le processus de mise en place dans le P793.

Plus que l'âge de l'explant, je pense que c'est la position du noeud sur la hampe qui a de l'importance. C'est du moins ce que j'ai pu lire ici ou là. Plus le noeud est près de la base de la hampe, plus il y aura de chances que le bourgeon donne un keiki.

Je commande l'hypochlorite de calcium sur Phytorchid. J'ai lu qu'on l'utilise aussi pour traiter l'eau des piscines.

Merci bien je vais voir ca quand j'ai du temps

Salut Franck,
les hormones que tu as dans le milieu stimulent les bourgeons axilaires et les activent donnant soit des hampes soit des keikis. Une fois que les keikis ont commencé à se développer, il faut effectivement les repiquer sur milieu normal pour induire les racines.

"paradoxalement" l'effet des hormones (mélange auxine -cytokinine dans ce cas) est aussi de produire ces "trucs" informes qu'on appelle des cals. Chaque fragment de ces cals a la capacité de donner une plante entière donc c'est cette "prolifération" qui constitue le clonage. Tant que ces cals sont maintenus hormones ils ne feront a priori qu'augmenter de volume mais tu peux aussi voir des protocormes se développer. Par contre, il faut repiquer toutes les 4 semaines pour éviter le brunissement. Tu repiques ensuite les protocormes sans les abimer sur milieu normal. Tout cela est plus délicat que les keikis. ca ne marche pas toujours et ca induit beaucoup plus de mutations si ca n'est pas bien maitrisé.

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www.caladenia.net:toutes mes photos d'orchidées sauvages d'Australie occidentale

Salut Etienne et merci pour tes explications.
J'étais prêt à attendre l'émission de racines dans le milieu de clonage pour repiquer dans le milieu normal (comme je l'ai fait avec les plantules qui sont sur les photos plus haut dans le sujet).
Je vais plutôt suivre tes conseils.
J'ai un peu peur d'abimer les cals. Penses-tu que je puisse repiquer, dans le milieu normal, les cals en entier (sans les éclater en plusieurs morceaux) avec le fragment de vieille hampe qui les porte ? Si plusieurs plantules se forment, il sera peut-être possible de les séparer les unes des autres plus tard. Non ?
Merci pour ton aide !

Au fait, depuis leur repiquage dans du milieu normal (du P668 dans mon cas), mes plantules qui perdaient leurs feuilles ont l'air de bien repartir. Je me rendrai quand-même mieux compte dans quelques semaines.

Attends de voir des protocormes se former. Ca peut prendre du temps et il faut repiquer toutes les 4 semaines. N'hésite pas à en lever le reste de hampe et à découper les gros cals (plus de 5mm de diamètre) avec un scalpel. Ce que tu peux faire à chaque repiquage, c'est récupérer les protocormes pour les mettre sur milieu normal et remettre les cals restant sur milieu de clonage. Ca peut durer un moment comme ça et générer plein plein de clones.

n'hésite pas à le faire de suite

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Bien ça la glovebox je te pique l'idée

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Mon blog : http://www.orchidcyril.fr

Tu peux ! Je l'ai moi-même piquée à d'autres

Petite question bête certainement : Pourrait-on utiliser des colliers en plastique? Exactement les mêmes que ceux que tu utilises mais pas en inox?
La javel abîmerait trop peut être...?

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Mélissa, Talence (33), Bientôt 150 orchidées cultivées sous éclairage artificiel (orchidarium) ou près des fenêtres (S/SE)
"Patience et longueur de temps font plus que force ni que rage"
Je suis une fanatique fortement atteinte, mais s'il vous plaît, ne me soignez pas !!

Exactement!

Jules

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Retour dans les orchidées!

Merci, je m'en doutais

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